Topo™ TA Cloning™ Kit für die Sequenzierung, ohne kompetente Zellen

Die TOPO® TA Cloning® Kits für die Sequenzierung bieten eine äußerst effiziente, 5-minütige, Klonierungsstrategie in einem Schritt („TOPO® Cloning“) für die direkte Einführung der Taq-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkte in einen Plasmidvektor zur Sequenzierung. Jedes Kit verwendet den pCR™4-TOPO® TA-Vektor mit spezieller Sequenzierung der Primerstellen, die bei jeder Reaktion mehr Insert-Sequenz und weniger Vektorsequenz ergeben; sie sind je nach Ihren Anforderungen und Ihrem Budget mit einer Vielzahl von kompetenten Zellen oder ohne kompetente Zellen erhältlich. Diese Kits enthalten alles Notwendige zur Klonierung und Selektion rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten. Merkmale der TOPO® TA Cloning® Kits für die Sequenzierung:

• Mehr Sequenz: Ermöglicht mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz bei der Verwendung von Standard-Sequenzierungs-Primern
• Schnell und einfach: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten• Effizient: Bis zu 95 % Klone mit dem korrekten Insert
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 4000 Referenzen

TOPO® TA Cloning® Kits für die Sequenzierung – Übersicht

Vektor: pCR™4-TOPO® TA-Vektor: Optimierter Klonierungsvektor für verbesserte Sequenzierungsergebnisse

Klonierungsmethode: TOPO® TA Cloning®: Ligation von PCR-Produkten auf Basis von Topoisomerase I in 5 Minuten mit 3´A-Überhängen (Taq-amplifiziert) mit dem Vektor

Kompetente Zellen: Verschiedene Optionen: Wählen Sie aus den Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-beständigen oder schnell wachsenden kompetenten Zellen oder verwenden Sie Ihr eigenes

pCR™4-TOPO® TA-Vektor: Optimiert für die Sequenzierung
Wir haben einen Großteil der multiplen Klonierungsstelle aus dem pCR™4-TOPO® TA-Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stellen auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR™4-TOPO® TA-Vektor bietet Bindungsstellen für 4 Standard-Sequenzierungsprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.

pCR™4-TOPO® TA-Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR™4-TOPO® TA-Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB -Genfusion für eine positive Selektion und das Blau-Weiß-Screening. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.

Vereinfachte TOPO® basierte Klonierung
Mit dem TOPO® Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, eine Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren und somit Zeit und Geld sparen. Der in diesem Kit verwendete pCR™4-TOPO® TA-Vektor enthält 3´T-Überhänge für eine effiziente Ligation von Taq-amplifizierten PCR-Produkten mit 3´A-Überhängen.

Der Standard für die Klonierung
Bei der Klonierung ist das TOPO® Verfahren bereits seit über zehn Jahren ein verlässlicher Partner für Tausende von Wissenschaftlern. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO® Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

TOPO® TA Cloning® Kits für die Sequenzierung — Kit-Optionen
Das TOPO® TA Cloning® Kit für die Sequenzierung kann mit einer Vielzahl kompetenter Zellen erworben werden, die je nach Ihren Anforderungen unterschiedliche Vorteile bieten:

• Allgemeine Klonierung: TOP10 (Kat.-Nr. Nr. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Hocheffizientes Klonen: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. Nr. K4580-01, K4580-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. Nr. K4595-01, K4595-40)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. Nr. K4530-20)
• Stellen Sie Ihre eigenen Zellen bereit: Mehr Flexibilität und Kosteneffizienz (Kat.-Nr. Nr. 450030)

Wir bieten auch eine Version des Kits mit PureLink™ Quick Plasmid-Miniprep-Kit (Kat.-Nr. K4575-02), entwickelt zur Isolierung eines sauberen, sequenzierungsbereiten, rekombinanten Plasmids.

Verwandte Links

• Kundenspezifische Dienstleistungen für Vektorerstellung und Klonierung
• Auswahlhilfe für Kits zur Aufreinigung von Plasmid-DNA
• PCR-Reagenzien, Instrumente und Verbrauchsmaterialien