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Applied Biosystems™
MAGnify™ Chromatin Immunoprecipitation System
Das MAGnify™ Chromatin Immunoprecipitation System ist ein modernisierter und optimierter Assay für die Anreicherung von Chromatin/Proteinkomplexen und die DNA-Rückgewinnung mittelsWeitere Informationen
| Katalognummer | Menge |
|---|---|
| 492024 | 1 Kit |
Katalognummer 492024
Preis (EUR)
728,00
Each
Menge:
1 Kit
Preis (EUR)
728,00
Each
Das MAGnify™ Chromatin Immunoprecipitation System ist ein modernisierter und optimierter Assay für die Anreicherung von Chromatin/Proteinkomplexen und die DNA-Rückgewinnung mittels Magnet-Bead-Erfassungstechnologie. Die isolierte DNA ist für nachgelagerte Analysen mit Methoden wie PCR- oder qPCR-basierten Assays oder massive parallele DNA-Sequenzierung bereit.
ChIP
Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) ist eine leistungsstarke Technik zur Untersuchung der Assoziation bestimmter Proteine mit spezifischen Regionen des Genoms. Diese sequenzspezifischen, DNA-bindenden Proteine spielen offenbar eine Rolle bei zellulären Prozessen wie DNA-Replikation, -Rekombination, -Reparatur und -Segregation, chromosomaler Stabilität, Zellzyklusprogression und epigenetischem Silencing. Für einen standardmäßigen ChIP-Assay wird eine Zelle über Formaldehydbehandlung fixiert. Das Chromatin wird abgeschert und über einen hochspezifischen Antikörper immunpräzipitiert. Wissenschaftler analysieren dann die DNA zur Ermittlung der genomischen Regionen, in denen die Chromatin-assoziierten Proteine in vivo an das Chromatin binden. Dieses Kit ermöglicht es Forschern, mit geringeren Probemengen als bei herkömmlichen ChIP-Workflows zu beginnen, was bei wertvollen Proben von Vorteil ist. Das Protokoll kann zudem in einem Tag abgeschlossen werden, im Vergleich zu 2 – 3 Tagen bei herkömmlichen ChIP-Assays. Das Kit kann mit unserem Angebot an ChIP-validierten Antikörpern verwendet werden und ist außerdem eine Ergänzung zu MethylCode™ und NCode™ Produkten für die nachgelagerte Epigenetikforschung.
Verwendung des MAGnify™ Systems
Bei Verwendung des MAGnify™ Systems werden Zellen oder Gewebe mit Formaldehyd behandelt, um Protein-Protein- und Protein-DNA-Quervernetzungen zwischen nahegelegenen Molekülen im Chromatinkomplex zu erzeugen. Die Zellen werden dann lysiert, und Chromatin wird aus den Kernen freigegeben und durch Ultraschall abgeschert zur Reduzierung der durchschnittlichen DNA-Fragmentgröße auf 200–500 bp. Dieses dient der Analyse mit quantitativer Echtzeit-PCR (qPCR) oder 100–300 bp für Analysen durch massive parallele DNA-Sequenzierung. Danach folgen Immunpräzipitation und Isolation der vernetzten Proteine von Interesse mit einem spezifischen ChIP-qualifizierten Antikörper, konjugiert an Dynabeads™ Protein A/G. Die Formaldehyd-Quervernetzung wird durch Wärmebehandlung umgekehrt, und die mit dem Protein assoziierte DNA kann aufgereinigt werden. Die DNA ist nun bereit für spätere Analysen, wie Endpunkt-PCR oder quantitative PCR (qPCR), genomweite Analysen mit Promoter-Tiling-Arrays oder Sequenzierung der nächsten Generation. Für PCR/qPCR-Analysen werden Primer so ausgelegt, dass sie die gewünschte DNA-Sequenz von Interesse umfassen, und die Daten zeigen, ob das spezifische Protein von Interesse in vivo mit dieser DNA-Region assoziiert ist.
ChIP
Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) ist eine leistungsstarke Technik zur Untersuchung der Assoziation bestimmter Proteine mit spezifischen Regionen des Genoms. Diese sequenzspezifischen, DNA-bindenden Proteine spielen offenbar eine Rolle bei zellulären Prozessen wie DNA-Replikation, -Rekombination, -Reparatur und -Segregation, chromosomaler Stabilität, Zellzyklusprogression und epigenetischem Silencing. Für einen standardmäßigen ChIP-Assay wird eine Zelle über Formaldehydbehandlung fixiert. Das Chromatin wird abgeschert und über einen hochspezifischen Antikörper immunpräzipitiert. Wissenschaftler analysieren dann die DNA zur Ermittlung der genomischen Regionen, in denen die Chromatin-assoziierten Proteine in vivo an das Chromatin binden. Dieses Kit ermöglicht es Forschern, mit geringeren Probemengen als bei herkömmlichen ChIP-Workflows zu beginnen, was bei wertvollen Proben von Vorteil ist. Das Protokoll kann zudem in einem Tag abgeschlossen werden, im Vergleich zu 2 – 3 Tagen bei herkömmlichen ChIP-Assays. Das Kit kann mit unserem Angebot an ChIP-validierten Antikörpern verwendet werden und ist außerdem eine Ergänzung zu MethylCode™ und NCode™ Produkten für die nachgelagerte Epigenetikforschung.
Verwendung des MAGnify™ Systems
Bei Verwendung des MAGnify™ Systems werden Zellen oder Gewebe mit Formaldehyd behandelt, um Protein-Protein- und Protein-DNA-Quervernetzungen zwischen nahegelegenen Molekülen im Chromatinkomplex zu erzeugen. Die Zellen werden dann lysiert, und Chromatin wird aus den Kernen freigegeben und durch Ultraschall abgeschert zur Reduzierung der durchschnittlichen DNA-Fragmentgröße auf 200–500 bp. Dieses dient der Analyse mit quantitativer Echtzeit-PCR (qPCR) oder 100–300 bp für Analysen durch massive parallele DNA-Sequenzierung. Danach folgen Immunpräzipitation und Isolation der vernetzten Proteine von Interesse mit einem spezifischen ChIP-qualifizierten Antikörper, konjugiert an Dynabeads™ Protein A/G. Die Formaldehyd-Quervernetzung wird durch Wärmebehandlung umgekehrt, und die mit dem Protein assoziierte DNA kann aufgereinigt werden. Die DNA ist nun bereit für spätere Analysen, wie Endpunkt-PCR oder quantitative PCR (qPCR), genomweite Analysen mit Promoter-Tiling-Arrays oder Sequenzierung der nächsten Generation. Für PCR/qPCR-Analysen werden Primer so ausgelegt, dass sie die gewünschte DNA-Sequenz von Interesse umfassen, und die Daten zeigen, ob das spezifische Protein von Interesse in vivo mit dieser DNA-Region assoziiert ist.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
Zur Verwendung mit (Anwendung)Chromatin-Immunpräzipitation
Hochdurchsatz-KompatibilitätGeeignet für hohe Durchsätze
Menge1 Kit
ProbentypZellkulturen, DNA (genomisch), lebende Zellen
Ausreichend für24 Reaktionen
ProduktlinieMAGnify
TypImmunpräzipitationssystem
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Modul 1 (auf nassem Eis geliefert, bei 4 °C lagern):
• 2 × 1 ml Glycin (1,25 mol)
• 250 µl Dynabeads™ Protein A/G (nicht einfrieren)
• 1,4 ml Puffer für die reversible Vernetzung
• 500 µl magnetische Beads für die DNA-Aufreinigung (nicht einfrieren)
• 1,4 ml Puffer für die DNA-Aufreinigung
• 200 µl Proteinase K (20 mg/ml)
Modul 2 (auf nassem Eis geliefert, bei 4 °C lagern):
• 10 ml IP-Puffer 1
• 7,5 ml IP-Puffer 2
• 8 ml DNA-Waschpuffer
• 7,2 ml DNA-Elutionspuffer
Modul 3 (auf Trockeneis geliefert, bei -20 °C lagern):
• 100 µl Protease-Inhibitoren (200 x)
• 15 µl Maus-IgG (1 µg/µl)
• 15 µl Kaninchen-IgG (1 µg/µl)
Modul (auf Trockeneis geliefert, bei -20 °C lagern):
• 8 ml Verdünnungspuffer
• 3,6 ml Lysepuffer
• 2 × 1 ml Glycin (1,25 mol)
• 250 µl Dynabeads™ Protein A/G (nicht einfrieren)
• 1,4 ml Puffer für die reversible Vernetzung
• 500 µl magnetische Beads für die DNA-Aufreinigung (nicht einfrieren)
• 1,4 ml Puffer für die DNA-Aufreinigung
• 200 µl Proteinase K (20 mg/ml)
Modul 2 (auf nassem Eis geliefert, bei 4 °C lagern):
• 10 ml IP-Puffer 1
• 7,5 ml IP-Puffer 2
• 8 ml DNA-Waschpuffer
• 7,2 ml DNA-Elutionspuffer
Modul 3 (auf Trockeneis geliefert, bei -20 °C lagern):
• 100 µl Protease-Inhibitoren (200 x)
• 15 µl Maus-IgG (1 µg/µl)
• 15 µl Kaninchen-IgG (1 µg/µl)
Modul (auf Trockeneis geliefert, bei -20 °C lagern):
• 8 ml Verdünnungspuffer
• 3,6 ml Lysepuffer