Amplex™ Red Wasserstoffperoxid/Peroxidase-Assay-Kit
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Invitrogen™

Amplex™ Red Wasserstoffperoxid/Peroxidase-Assay-Kit

Das Amplex™ Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit enthält einen empfindlichen einschrittigen Assay, der das Reagenz Amplex™ Rot (10-Acetyl-3,7-Dihydroxyphenoxazin) zum NachweisWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
A22188500 Assays
Katalognummer A22188
Preis (EUR)
621,65
Exklusiv online
676,00
Ersparnis 54,35 (8%)
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Menge:
500 Assays
Preis (EUR)
621,65
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Das Amplex™ Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit enthält einen empfindlichen einschrittigen Assay, der das Reagenz Amplex™ Rot (10-Acetyl-3,7-Dihydroxyphenoxazin) zum Nachweis der Aktivität von Wasserstoffperoxid (H 2 O 2) oder Peroxydase verwendet. Das Reagenz Amplex™ Red wurde in Kombination mit Meerrettichperoxidase (HRP) zum Nachweis von H2O 2 verwendet, das von biologischen Proben, einschließlich Zellen, freigesetzt oder in enzymgekoppelten Reaktionen erzeugt wird. Außerdem kann das Reagenz Amplex™Rot als höchstempfindlicher Assay für die Peroxydase-Aktivität verwendet werden, wenn überschüssiges H 2O2 vorhanden ist. In Anwesenheit von Peroxidase reagiert das Reagenz Amplex™ Rot mit H 2 O 2 in einem stöchiometrischen Verhältnis von 1:1 und produziert das rot-fluoreszierende Oxidationsprodukt Resorufin. Resorufin hat ein Anregungs- und ein Emissionsmaximum bei ca. 571 nm bzw. 585 nm. Wegen des hohen Extinktionskoeffizienten (58.000 ± 5.000 cm–1M–1) können Sie den Assay fluorometrisch oder spektralphotometrisch durchführen. Mit dieser Reaktion kann die geringe Menge von 10 Pikomol H2O2 in einem Volumen von 100 µl bzw. 1 x 10–5 U/ml HRP nachgewiesen werden.

Spezifikationen von Amplex™ Red Hydrogenperoxid/Peroxidase-Assay-Kit:
• Ex/Em des Reaktionsprodukts Resorufin: ∼571/585 nm
• Empfindlicher einstufiger Assay zum In-vitro-Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Peroxidase
• Kann die Aktivität von nur 10 Pikomol Wasserstoffperoxid bzw. 10 µU/ml Meerrettich-Peroxidase in einem Assay-Volumen von 100 µl nachweisen
• Stellt genügend Reagenzien für ca. 500 Assays mit Reaktionsvolumen von 100 µl pro Assay bereit
• Für 96-Well-Fluoreszenz- oder Absorptions-Mikrotiterplatten-Lesegeräte entwickelt, lässt sich jedoch einfach für andere Volumen sowie für Fluorimeter und Spektralphotometer anpassen


Weitere Substrate für Oxidasen
Weitere Informationen zu diesen Produkten finden Sie unter Substrate für Oxidasen, einschließlich Amplex Rot Kits – Abschnitt 10.5 im Molecular Probes™ Handbuch.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke bei Menschen oder Tieren vorgesehen.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
NachweisverfahrenFluoreszent
FarbstofftypAndere Etiketten oder Farbstoffe
FormatRöhrchen, 96-Well-Platte
Menge500 Assays
VersandbedingungRaumtemperatur, Raumtemperatur
Zur Verwendung mit (Anwendung)Wasserstoffperoxid/Peroxidaseassay
Zur Verwendung mit (Geräte)Mikrotiterplatten-Lesegerät, Spektralphotometer, Fluorometer
ProduktlinieAmplex
ProdukttypWasserstoffperoxid/Peroxidaseassay-Kit Rot
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
In einem Tiefkühlgerät (-5 bis -30 °C) lagern und vor Licht schützen.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

I'm using an Amplex Red kit, the reagent changes color to pink almost immediately in my own Krebs-Ringer buffer but not in HBSS. Why is this?

The components of Krebs-Ringer buffer (salts) should not cause oxidation of the Amplex reagent (which, in the presence of peroxidase and H2O2 oxidizes to resorufin, which is pink in color and fluorescent). Try water alone (the water used to make the Krebs-Ringer buffer). Since Hank's Buffered Saline Solution is typically purchased rather than made in the lab, it likely would not have the same contaminant. Another option is to degas the buffer prior to use to removed dissolved oxygen radicals.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Can I use the Amplex Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit (Cat. No. A22188) to measure H2O2 from frozen cell culture supernatant?

We recommend using fresh samples that have not been frozen since H2O2 degrades over time and more readily in diluted form or in solutions that contain metal ions or natural antioxidants. For assaying cell culture supernatant, we would recommend analyzing samples as soon as possible.

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Can Amplex Red Assays be performed using cell lysates?

This is not recommended. The presence of endogenous proteases can complicate the assay by degrading the horseradish peroxidase (HRP). Endogenous peroxidases and antioxidants can modify the H2O2 required for the reaction, competing with HRP (and catalase) for the substrate.

The Amplex Red Assays are best performed with either purified enzymes or extracted H2O2 in a defined buffer system, extracellular solutions or body fluids (media, serum, etc.) that do not exhibit high levels of endogenous protease or oxidase activity and do not contain antioxidants.

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Zitierungen und Referenzen (62)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Roles for the human ATP-dependent Lon protease in mitochondrial DNA maintenance.
Authors:Lu B,Yadav S,Shah PG,Liu T,Tian B,Pukszta S,Villaluna N,Kutejová E,Newlon CS,Santos JH,Suzuki CK
Journal:The Journal of biological chemistry
PubMed ID:17420247
Similar transition states mediate the Q-cycle and superoxide production by the cytochrome bc1 complex.
Authors:Forquer I,Covian R,Bowman MK,Trumpower BL,Kramer DM
Journal:The Journal of biological chemistry
PubMed ID:17008316
Overexpression of Na(+)/K (+)-ATPase parallels the increase in sodium transport and potassium recycling in an in vitro model of proximal tubule cellular ageing.
Authors:Silva E, Gomes P, Soares-da-Silva P,
Journal:J Membr Biol
PubMed ID:17334838
'Na(+)/K(+)-ATPase plays a key role in the transport of Na(+) throughout the nephron, but ageing appears to be accompanied by changes in the regulation and localization of the pump. In the present study, we examined the effect of in vitro cell ageing on the transport of Na(+) and K(+) ions ... More
Reactive oxygen species production via NADPH oxidase mediates TGF-beta-induced cytoskeletal alterations in endothelial cells.
Authors:Hu T, Ramachandrarao SP, Siva S, Valancius C, Zhu Y, Mahadev K, Toh I, Goldstein BJ, Woolkalis M, Sharma K
Journal:Am J Physiol Renal Physiol
PubMed ID:16159901
'Cytoskeletal alterations in endothelial cells have been linked to nitric oxide generation and cell-cell interactions. Transforming growth factor (TGF)-beta has been described to affect cytoskeletal rearrangement in numerous cell types; however, the underlying pathway is unclear. In the present study, we found that human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) have ... More
Subcellular localization of Nox4 and regulation in diabetes.
Authors:Block K, Gorin Y, Abboud HE,
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:19706525
'Oxidative stress is implicated in human diseases. Some of the oxidative pathways are harbored in the mitochondria. NAD(P)H oxidases have been identified not only in phagocytic but also in somatic cells. Nox4 is the most ubiquitous of these oxidases and is a major source of reactive oxygen species (ROS) in ... More