TaqMan™ Advanced miRNA cDNA Synthese-Kit

Das Applied Biosystems™ TaqMan™ Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit nutzt die universelle chemische Reaktion zur reversen Transkription (RT), um cDNA-Matrizen herzustellen, die mit TaqMan™ Advanced miRNA Assays für den Nachweis und die Quantifizierung reifer menschlicher miRNA in biologischen Proben verwendet werden können.

Das TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit nutzt 3'-Poly-A-Polyadenylierung und 5'-Ligation einer Adaptorsequenz zum beidseitigen Erweitern der reifen miRNA vor der reversen Transkription. RT-Universalprimer erkennen die an den erweiterten 5'- und 3'-Enden vorhandenen universellen Sequenzen der reiferen miRNAs. Alle reifen miRNAs in der Probe werden in cDNA umgeschrieben

Zur Verbesserung des Nachweises niedrig exprimierter miRNAs wird die cDNA dann mit miR-Amp Universalprimern und dem miR-Amp Master Mix amplifiziert, um die Menge der cDNA für jedes Ziel gleichmäßig zu erhöhen, was die relative Expressionsunterschiede aufrechterhält. Im Gegensatz zur herkömmlichen Preamplifikation erkennen miR-Amp Universalprimer universelle Sequenzen, die allen reifen miRNAs an den 5'- und 3'-Enden hinzugefügt wurden, womit sichergestellt wird, dass keine unverhältnismäßige Amplifikation erfolgt.

• Empfindlichkeit: eine hohe Empfindlichkeit ermöglicht die Quantifizierung niedrig exprimierter miRNAs, insbesondere in biologischen Flüssigkeiten wie Plasma und Serum sowie in Gewebe
• Flexibilität: Die universelle RT-Chemie erzeugt universelle cDNA-Matrizen für sämtliche in der Probe vorhandene miRNAs, was wiederum zu mehr Flexibilität bei Ihrem Studienaufbau führt
• Probeneinsparung: erfordert nur 2 μl Plasma/Serum und erzeugt ausreichend cDNA für 600 qPCR-Reaktionen (20 μl) bzw. 1200 qPCR-Reaktionen (10 μl)
• Spezifität: Der 5'-Ligationsschritt ermöglicht die Unterscheidung von Einzelbasenpaaren entlang der gesamten miRNA-Sequenz, einschließlich schwer zu erkennender Fehlpaarungen am 5'-Ende
• Gold-Standard TaqMan-Chemie: Dieses Kit dient zur Verwendung mit TaqMan™ Advanced miRNA Assays für qPCR, die auf dem branchenweit führenden Bioinformatik-Versuchsplanungs-Pipeline- und Validierungssystem von Thermo Fisher Scientific aufbauen und auch innerhalb eng verwandter miRNA-Familien zu einer hohen Spezifität und minimalen Kreuzreaktivität beitragen.