Das Thermo Scientific MCF7 (+hIGF-1) Kontrolllysat ist ein stimuliertes Zelllysat, das für die Expressionsstufen und die Phosphorylation wichtiger Ziele im Signalweg validiert wurde.
Merkmale des MCF7 (+hIGF-1) Kontrolllysats:
• Validiert für den Nachweis und die Phosphorylation von AKT-, PTEN-, IRS1-, IGF1-R-, GSK3a-, GSK3b-, PRAS40-, mTOR-, p70S6K- und TSC2-Proteinen
• Optimiert—Optimierte Stimulations- und Lysebedingungen zum Nachweis von AKT-Signalzielen
•Praktisch—gebrauchsfertiges Lysat zur Immunpräzipitation, Immunpräzipitation für Massenspektrometrie und Western Blotting
• Zwei Jahre lang stabil bei -80 °C
Der Signalweg dient als regulatorischer Hauptweg für Zellwachstum und -proliferation, und die Phosphorylation spielt eine wichtige Rolle bei der Modulation. Die aberrante Aktivierung dieses Signalweges fördert das Überleben von Tumorzellen bei vielen Krebsarten. Dieses Lysat wurde für die Expression von zehn Schlüsselproteinen und die Phosphorylation im Signalweg (AKT, PTEN, IRS1, IGF1-R, GSK3a, GSK3b, PRAS40, mTOR, p70S6K und TSC2) validiert.
Die MCF-7-Zelllinie ist eine humane epithele Brustkrebszelllinie mit Östrogen-, Progesteron- und Glukokortikoid-Rezeptorexpression und wird als In-vitro-Modell bei Brustkrebs verwendet. Das MCF7-Zelllysat (+hIGF-1) wird als gefriergetrocknetes Lysat mit einer Standardkonzentration von 1 mg/ml (500 mg pro Fläschchen) geliefert. Lysate werden in nicht denaturierenden Puffern ohne Ladefarbstoffe oder Dissoziationsmittel (d. h. es wurde kein 2-Mercaptoethanol oder Dithiothreitol hinzugefügt) hergestellt. Für Western Blot-Analyse Lysat 5 Minuten lang auf 95°°C erhitzen. Bei Bedarf vor dem Erhitzen Reduktionsmittel hinzufügen. Das empfohlene Ladevolumen pro Signalweg beträgt 10–20 μl (10–20 µg).
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