Das Thermo Scientific HCT 116 (+hIGF-1) Kontrolllysat ist ein stimuliertes Zelllysat, das für die Expressionsstufen und die Phosphorylierung wichtiger Ziele im RAS-Signalweg validiert wurde.
Merkmale des HCT 116 (+hIGF-1) Kontrolllysats:
• Validiert für die Expression von RAS durch Western Blotting und von NRAS, KRAS und HRAs durch Massenspektrometrie-Analyse
• Optimiert—optimierte Stimulations- und Lysebedingungen zum Nachweis von RAS-Signalzielen
• Praktisch—gebrauchsfertiges Lysat zur Immunpräzipitation, Immunpräzipitation für Massenspektrometrie und Western Blot-Anwendungen
• Zwei Jahre lang stabil bei -80 °C
Die RAS-Familie der GTPase Proteine moduliert zwei wichtige Signalwege, die am Zellwachstum und der Proliferation beteiligt sind: Die MAPK- und PI3K-Signalwege. Die aberrante Aktivierung von RAS-Proteinen fördert die konstitutive Aktivierung von Zellwachstum und Proliferation, die zu Krebs führen können. Mutationen in den NRAS-, KRAS- und HRAS-Onkogenen sind die häufigsten Mutationen bei Humankrebs. Dieses Lysat wurde für Expressionsstufen der drei RAS-Isoformen mit Massenspektrometrie validiert.
Die HCT 116-Zelllinie ist eine humane Darmkrebs-Epithelzelllinie und wurde in Proliferations- und Tumorigenizitätsstudien für Darmkrebs verwendet. Das HCT 116-Zelllysat (+hIGF-1) wird als gefriergetrocknets Lysat mit einer Standardkonzentration von 1 mg/ml (500 mg pro Fläschchen) geliefert. Lysate werden in nicht denaturierenden Puffern ohne Ladefarbstoffe oder Dissoziationsmittel hergestellt (d. h. es wurde kein 2-Mercaptoethanol oder Dithiothreitol hinzugefügt). Für Western Blot-Analyse Lysat 5 Minuten lang auf 95°°C erhitzen. Bei Bedarf vor dem Erhitzen Reduktionsmittel hinzufügen. Das empfohlene Ladevolumen pro Signalweg beträgt 10–20 μl (10–20 µg).
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