CellTrace™ Blue Cell Proliferation Kit, for flow cytometry

Das CellTrace Blue Cell Proliferation Kit dient zur In-vitro- und In-vivo-Markierung von Zellen, damit mehrere Generationen mithilfe von Farbstoffverdünnung in der Durchflusszytometrie rückverfolgt werden können. Das CellTrace Blue Reagenz wurde speziell für die Anregung mit einem 355 nm- oder 375 nm-Laser entwickelt und kann leicht mit Reagenzien und Antikörpern kombiniert werden, die von anderen gängigen Lasern angeregt werden.

• Hervorragende Leistung – Helle Einpeak-Färbung ermöglicht die Visualisierung mehrerer Generationen
• Langfristige Signalstabilität – Mehrere Tage nach der Färbung in Zellen retiniert
• Vielseitig – Verschiedene Farben verfügbar für die einfache Kombination mit Antikörpern oder Markern der Zellfunktion, wie GFP
• Einfaches, robustes Färbeprotokoll

Hervorragende Fluoreszenzfärbung
Die erfolgreiche Proliferationsanalyse durch Farbverdünnung (siehe Abbildung unten) erfordert einen extrem hellen Farbstoff, um fluoreszierend markierte Zellen nach mehreren Zellteilungen von Auto-Fluoreszenz zu unterscheiden. Die durch den Farbstoff CellTrace Blue erzielte intensiv fluoreszierende Färbung ermöglicht die Darstellung von fünf oder mehr Generationen proliferierender Zellen, bevor das Signal durch intrinsische zelluläre Eigenfluoreszenz ausgelöscht wird. Eine konsistente, homogene Färbung führt zu sehr geringen Fluoreszenzschwankungen zwischen Zellen in einer Population, sodass verschiedene Generationen ohne komplexe Modellierungssoftware zu erkennen sind. Die empfohlene Arbeitskonzentration für periphere mononukleäre Blutkörperchen beträgt 5 bis 10 µM. Wie bei allen Reagenzien, die in der Durchflusszytometrie verwendet werden, um ein optimales Signal zu erhalten, wird eine Reagenzientitration dringend empfohlen.

Langfristige Signalretention
Im Gegensatz zu Färbungen, die die Lipidmembran von Zellen kennzeichnen, durchquert CellTrace Blue die Plasmamembran und bindet kovalent innerhalb von Zellen, wo der stabile, gut beibehaltene Fluoreszenzfarbstoff ein konsistentes Signal liefert, selbst nach mehreren Tagen in einer Zellkulturumgebung. CellTrace Blue Farbstoff bindet kovalent an alle freien Amine an der Oberfläche und im Inneren von Zellen und weist nur geringe Zytotoxizität auf, mit minimalen beobachteten Auswirkungen auf die Proliferationsfähigkeit oder Biologie von Zellen.

Einfaches Multiplexing mit anderen Fluorophoren
Die UV-Anregung und die schmale Emission von CellTrace Blue machen es ideal für Multiplexing, da es außerhalb der spektralen Emissionsprofile der meisten anderen Farbstoffe und fluoreszierenden Proteine liegt.

Einfaches, robustes Färbeprotokoll
Das CellTrace Blue Cell Proliferation Kit enthält praktische Einwegfläschchen mit Trockenfarbstoff, um Experimente in kleinem Maßstab zu ermöglichen, ohne dass überschüssige Farbstoffmengen vorbereitet werden müssen. Durch Auflösen des Fläschcheninhaltes in wasserfreiem DMSO wird vor Gebrauch eine Stammlösung zubereitet. Zum Färben von 1 ml Zellen in Protein-freiem Medium wird in der Regel 1 µl dieser Stammlösung verwendet. Zellen sollten 20 Minuten lang bei Raumtemperatur unter leichtem Schütteln angefärbt werden. Ein kurzes Waschen mit Komplettmedium löscht den gesamten in der Lösung verbleibenden Farbstoff aus.