Phusion U Hot Start DNA Polymerases
Phusion U Hot Start DNA Polymerases
Thermo Scientific™

Phusion U Hot Start DNA Polymerases

Thermo Scientific Phusion U DNA-Polymerase ist ein neuartiges, speziell entwickeltes High-Fidelity-Enzym, das mithilfe der Fusionstechnologie entwickelt wurde. Durch eine urheberrechtlichWeitere Informationen
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KatalognummerFarbeAnzahl Reaktionen
F556LGreen500 Reaktionen
F556SGreen100 Reaktionen
F555LColorless500 Reaktionen
F555SColorless100 Reaktionen
Katalognummer F556L
Preis (EUR)
916,00
Each
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Farbe:
Green
Anzahl Reaktionen:
500 Reaktionen
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Preis (EUR)
916,00
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Thermo Scientific Phusion U DNA-Polymerase ist ein neuartiges, speziell entwickeltes High-Fidelity-Enzym, das mithilfe der Fusionstechnologie entwickelt wurde. Durch eine urheberrechtlich geschützte Mutation in der sogenannten dUTP-Bindungstasche von Phusion überwindet Phusion U eine wichtige Einschränkung von Proofreading-Enzymen, denn es ist in der Lage, dUTP zu integrieren und Uracil in DNA-Templates durchzulesen.

Neben der Uracilanwendung bietet Phusion U selbstverständlich alle Eigenschaften anderer Phusion DNA-Polymerasen wie hohe Genauigkeit, Geschwindigkeit, Fähigkeit zur Amplifikation langer Amplikons bis zu 20 kb und eine hohe Spezifität mit auf Affibody basiertem Heißstart. Diese Merkmale machen Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase zu einer hervorragenden Wahl für wichtige Anwendungen wie die Amplifikation von bisulfit-konvertierter oder beschädigter DNA sowie die Kontrolle der Verschleppungskontamination.

Die Phusion U Hot-Start Green DNA-Polymerase ist eine Kombination aus Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase und 5X Phusion Green-Puffer. Die Puffer enthalten ein Dichtereagenz und zwei Tracking-Farbstoffe zum direkten Auftragen von PCR-Produkten auf ein Gel. Der Farbpuffer beeinträchtigt die Leistung von Phusion U nicht und ist mit Downstream-Prozessen wie DNA-Sequenzierung, Ligation und Restriktionsverdau kompatibel.

Besondere Merkmale

Genauigkeit – DNA-Polymerase mit hoher Wiedergabetreue (25X Taq)
Uracil-Toleranz – entwickelt zur Integration von dUTP und zur Amplifikation von Uracil-enthaltenen Templates
Spezifität – Heißstart für weniger unspezifische Amplifikation und Primer-Abbau
Geschwindigkeit – kurze Extensionszeiten (15 bis 30 s/kb)
Green-Format – ermöglicht das direkte Auftragen von PCR-Produkten auf Gele

Anwendungen

• Amplifikation von bisulfit-konvertierter DNA
• Amplifikation von geschädigter oder gealterter DNA
• Kontrolle gegen Verschleppen von Kontaminationen
• Uracil-Exzision-basierte (USER) Klonierungsmethoden

Verwendung der Phusion DNA-Polymerasen
Annealing-Regeln für Phusion DNA-Polymerasen unterscheiden sich von vielen gängigen DNA-Polymerasen (z. B. Taq DNA-Polymerasen). Optimale Ergebnisse erzielen Sie mit unserem Tm-Rechner unter www.thermofisher.com/tmcalculator.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Specifications
FarbeGreen
Wiedergabetreue (vs. Taq)25X
Hot-StartIntegrierter Heißstart
Anzahl Reaktionen500 Reaktionen
ÜberhangStumpf
PolymerasePhusion U Hot-Start DNA-Polymerase
ProdukttypHot-Start DNA-Polymerase
Menge500 Einheiten
ReaktionsformatEigenständig
VersandbedingungTrockeneis
Größe (Endprodukt)20 kb oder weniger
Konzentration2 U/μl
Zur Verwendung mit (Anwendung)Heißstart-PCR, PCR mit hoher Wiedergabetreue
GC-Rich PCR PerformanceHoch
ReaktionsgeschwindigkeitSchnell
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Enthält:
• Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase, 2 E/µl
• 5X Phusion Green HF-Puffer
• 5X Phusion Green GC-Puffer
• DMSO
Sowohl der Phusion Green HF-Puffer als auch der Phusion Green GC-Puffer ergeben 1,5 mM MgCl2 in der 1X Endkonzentration.

Bei -20 °C lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

Do Phusion DNA Polymerases add the non-template dependent 3'-A overhang?

Phusion DNA Polymerases generate blunt end products; therefore, blunt end cloning is recommended. If TA cloning is required, it can be performed by adding A overhangs to the blunt PCR product with e.g. Taq DNA Polymerase (Cat. No. EP0401). However, before adding the overhangs it is very important to remove all the Phusion DNA Polymerase by purifying the PCR product carefully, as the proofreading activity in Phusion DNA Polymerase is very strong. Any remaining Phusion DNA Polymerase will degrade the A overhangs, thus creating blunt ends again.

Can Phusion DNA Polymerases extend at 1 second/kb?

Yes it is possible, especially when amplifying smaller amplicons. Processivity of Phusion DNA Polymerases is 10 times that of Pfu. We recommend extension times of 15 s/kb for Phusion Flash PCR Master Mix. 15 s/kb is a conservative value that we can promise to work with almost any amplicon. In many cases, significantly shorter extension times (0-5 s/kb) can be used without compromising the yield. What separates Phusion Flash DNA Polymerase from other fast polymerases is that all steps in the PCR protocol can be shortened, including annealing and denaturation. This results in extremely fast protocols as compared with any other polymerase.

Can I use Phusion Green and Phire Green PCR products for subsequent applications such as sequencing, ligation, and restriction digestion?

Yes. The dyes do not interfere with downstream applications such as DNA sequencing, ligation, and restriction digestion.

What dyes are present in Phusion Green and Phire Green buffers?

Phusion Green and Phire Green buffers contain two dyes for monitoring electrophoresis progress. The blue dye migrates with 3-5 kb DNA fragments and the yellow dye migrates faster than 10 bp DNA fragments in 1% agarose gel. The dyes have excitation peaks at 424 nm and 615 nm, respectively.