Las ADN polimerasas de alta fidelidad Thermo Scientific Phusion establecen un nuevo referente para PCR de alto rendimiento. Con una tasa de errores 50 veces menor que la de Taq y 6 veces inferior a la de Pfu, las polimerasas de ADN de alta fidelidad Phusion son una opción excelente para la clonación y otras aplicaciones que requieren alta fidelidad. Las ADN polimerasas Phusion ofrecen un rendimiento sólido con tiempos de protocolo cortos, incluso en presencia de inhibidores de PCR. Generan una mayor producción con menos cantidad de enzimas que otras ADN polimerasas.

Aspectos destacados

• Configuración de la reacción a temperatura ambiente
• No hay amplificación no específica y degradación de cebadores durante la preparación de la reacción
• Reactivación en tiempo cero debido a la tecnología de inicio en caliente única
• Alta fidelidad (52X Taq)
• PCR rápida gracias a los breves tiempos de extensión (15-30 s/kb)
• Reacciones sólidas, mínima optimización necesaria
• Mayor producción con cantidades de enzima mínimas
• Disponibles como un formato de tampón verde que permite la carga directa en geles (F-566S o F-566L)

Mediante la ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Hot Start II, la amplificación procede sin la producción de productos no específicos debido a la combinación de ADN polimerasa Phusion y un ligando Affibody específico y ligado de forma reversible que inhibe la actividad de la ADN polimerasa a temperatura ambiente. El ligando Affibody también inhibe la actividad de exonucleasa 3´→5´ de la polimerasa, lo que evita la degradación de los primers y del ADN de la plantilla durante la preparación de la reacción. A temperaturas que potencian la actividad de la polimerasa, se libera el ligando, lo que activa completamente la polimerasa. La ADN polimerasa Phusion Hot Start II se reactiva inmediatamente a temperaturas elevadas por lo que no requiere un paso de activación diferente en protocolos de PCR. La mezcla maestra de PCR de alta fidelidad Phusion Hot Start II es una práctica mezcla 2X diseñada para minimizar el número de pasos de pipeteo. La mezcla maestra contiene la ADN polimerasa Phousion Hot Start II, nucleótidos y tampón de reacción optimizado, incluido el MgCl₂. El usuario solo tiene que añadir a la reacción de PCR el molde y los cebadores.

Aplicaciones

• PCR de alta fidelidad
•
• Ato rendimiento de moldes difíciles (con gran contenido en GC)
• Generación de moldes para secuenciación
• PCR multiplex
• PCR de largo alcance
• Clonación
• Mutagénesis
• Micromatriz

Uso de ADN polimerasas Phusion
Las reglas de recocido para ADN polimerasas Phusion son diferentes de las de muchas ADN polimerasas comunes (como las ADN polimerasas Taq). Para obtener resultados óptimos, utilice nuestra calculadora Tm en www.thermofisher.com/tmcalculator.