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TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector, without competent cells
Invitrogen™

TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector, without competent cells

Das TA Cloning™ Kit Dual Promoter mit PCR™II Vektor ermöglicht eine schnelle und einfache Klonierungsstrategie für direktes Einfügen eines Taq-amplifiziertenWeitere Informationen
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KatalognummerAnzahl Reaktionen
K20702020 Reaktionen
K20704040 Reaktionen
Katalognummer K207020
Preis (EUR)
383,00
Each
Anzahl Reaktionen:
20 Reaktionen
Preis (EUR)
383,00
Each
Das TA Cloning™ Kit Dual Promoter mit PCR™II Vektor ermöglicht eine schnelle und einfache Klonierungsstrategie für direktes Einfügen eines Taq-amplifizierten PCR-Produkts in einen Plasmid-Vektor. Die T7- und Sp6-Promoter des pCR™II Vektors ermöglichen die In-vitro-Transkription des Inserts für die Herstellung von Sense- bzw. Antisense-Produkten. Das TA Cloning Kit Dual Promoter verwendet den pCR™II Klonierungsvektor und ExpressLink™ T4 DNA Ligase, um ein Ligationsprodukt in einem Ligationsschritt von fünfzehn Minuten bei Raumtemperatur zu erzeugen. Reaktionen erbringen in der Regel >80 % Rekombinationen mit Inserts.

Merkmale des TA Cloning™ Kits Dual Promoter:
• Schnell und praktisch — Ligation bei Raumtemperatur in 15 Minuten
• Effizient — Blau/Weiß-Screening und >80 % Klone mit korrektem Insert
• Flexibel — Wahl von Kanamycin- oder Ampicillin-Resistenz für eine flexible Antibiotika-Auswahl
• Sorgenfrei — Eliminiert jegliche enzymatischen Modifikationen des PCR-Produkts
• Optimiert — Erfordert keine Verwendung von PCR-Primern, die Restriktionsstellen enthalten

Der pCR™II Vektor bietet:
• 3'-T-Überhänge für die direkte Ligation von Taq-amplifizierten PCR-Produkten
• T7 und Sp6 Promoter zur In-vitro-RNA-Transkription und -Sequenzierung
• Ein vielseitiger Polylinker mit flankierenden EcoR I-Stellen für eine einfache Exzision von Inserts
• M13 Vorwärts- und Rückwärts-Primerstellen für die Sequenzierung

Funktionsweise von TA Cloning™
Taq-Polymerase hat eine nicht Template-abhängige Aktivität, die ein Einzel-Desoxyadenosin (A) an den 3'-Enden von PCR-Produkten einfügt. Der linearisierte Vektor in diesem Kit weist am 3‘-Ende Desoxythymidin (T)-Überhänge auf. Auf diese Weise können PCR-Inserts effizient mit dem Vektor ligiert werden.

Kit-Konfigurationen
Das TA Cloning™ Kit ist in einer Vielzahl von Konfigurationen erhältlich: mit One Shot™ INVF‘ chemisch kompetentem E. Coli (K2050-01 und K2050-40), One Shot™ TOP10F' chemisch kompetentem E. coli (K2060-01 und K2060-40) sowie ohne kompetente Zellen (K2750-20 und K2750-40) in Packungsgrößen mit 20 oder 40 Reaktionen.
Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.
Specifications
Bakterieller GehaltTOP10
Bakterien- oder HefenstammNicht enthalten
KlonierungsmethodeTA Cloning
Zur Verwendung mit (Anwendung)PCR Cloning
Anzahl Reaktionen20 Reaktionen
ProduktlinieTA Cloning
ProdukttypKlonierungskit
PromoterT7, SP6
Menge20 reactions
VektorpCRII
FormatKit
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Dieses Kit enthält den linearisierten pCR™II-Vektor, ExpressLink™ T4 DNA-Ligase, 5X ExpressLink™ T4 DNA-Ligationspuffer, dNTPs, 10X PCR-Puffer, steriles Wasser und Kontrollen.

Alle Komponenten sind bei –20 °C zu lagern. Alle Reagenzien bleiben garantiert 6 Monate stabil, wenn sie ordnungsgemäß gelagert werden.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

Have you compared in vitro transcription levels between SP6 and T7 promoters in your pCRII vectors?

No, we have not done in-house comparisons of transcription levels. It is widely known though that T7 polymerase produces more RNA than SP6 (on the order of 10-fold higher).

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.