Expressway™Lumio™ Expression and Detection System, without vector

El sistema de expresión y detección Expressway™ Lumio™ aprovecha la secuencia de reconocimiento Lumio™, una pequeña secuencia de seis aminoácidosMás información

Número de catálogo	Cantidad
K990060	1 kit

Número de catálogo K990060

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1 kit

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El sistema de expresión y detección Expressway™ Lumio™ aprovecha la secuencia de reconocimiento Lumio™, una pequeña secuencia de seis aminoácidos (Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys). El reactivo de detección Lumio™ une la secuencia de reconocimiento con alta especificidad y afinidad, lo que da como resultado una señal fluorescente brillante para el análisis de producción de proteínas en tiempo real y la detección inmediata de proteínas en gel. Además, el lisado de E. coli especializado Expressway, derivado del mutante slyD, elimina la unión inespecífica del reactivo de detección Lumio™ Green con la proteína SlyD endógena y proporciona un fondo óptimo para la detección de proteínas recombinantes (Figura 1). El kit de detección Lumio™ Green se incluye en el sistema para la detección en tiempo real de la síntesis de proteínas, así como la detección fácil de proteínas en gel. Los vectores Lumio™ (Figuras 2 y 3) también presentan:

• Sitios attR para una recombinación eficaz con cualquier vector de entrada Gateway™ flanqueado por attL
• de ATT™ Etiqueta Lumio N-terminal (vector pEXP3-DEST) con sitio de escisión TEV para la eliminación eficaz de la secuencia Lumio™ después de la purificación
• ™ Etiqueta Lumio C-terminal (vector pEXP4-DEST) para una detección fácil e inmediata en gel
• El promotor T7, el sitio de unión del ribosoma y el terminador T7 están separados en el espacio de forma óptima para una expresión de proteínas sin células

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Ubicación de detecciónDetección en gel

Tipo de proteína expresadaProteína soluble en agua

Mecanismo de expresiónExpresión sin células

Sistema de expresiónSin células

Tipo de productoSistema de detección y expresión Lumio

Cantidad1 kit

Línea de productosExpressway, Lumio

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

El sistema de expresión y detección Expressway™ Lumio™ incluye extracto de E. coli slyD-, tampón de reacción 2,5X IVPS E. coli, mezcla de enzimas T7, tampón de alimentación, mezcla de 19 aminoácidos, metionina, un plásmido de control, agua libre de DNAse/RNAse y un kit de detección Lumio™ Green para 20 reacciones en tiempo real o 100 aplicaciones en gel. Además de estos componentes, el kit N-term Expressway™ Lumio™ también incluye 6μg de vector pEXP3-DEST y el kit C-terminalExpressway™ Lumio™ 6μg de vector pEXP4-DEST. Conservar los vectores y el reactivo de detección a -20°C. Conservar todos los demás componentes a -80°C. Se garantiza la estabilidad durante 6 meses si se almacena correctamente.

Preguntas frecuentes

I accidentally stored my E. coli slyD-Extract, E. coli Reaction Buffer (-A.A.), and 2X feed buffer at room temperature. Can I still use them?

Unfortunately, this may result in a loss of activity.

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I've run out of the T7 RNA polymerase for my cell-free expression. What do you suggest I use?

We would recommend using T7 RNA polymerase (Cat. No. 18033019, 50 U/µL). Use 1-1.5 µL in a 50 µL reaction system.

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I'm getting smearing after running my cell-free expression reaction on a gel.. What could be the cause of this?

Smearing may occur if samples for the following reasons:

- Samples were not precipitated with acetone: precipitate proteins with acetone to remove background smearing.
- Too much protein was loaded: reduce the amount used.
- The gel itself was not clean: rinse the gel briefly before exposing to film.
- Ethanol was present in the protein synthesis reaction: make sure that any residual ethanol is removed during DNA purification.
- Check the date of your pre-cast gels: do not use gels after the expiration date.

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I'm seeing a ladder of small-sized products after running my reaction on a gel when using the Expressway system. Why is this?

There may be several reasons for why this is occurring. The most common are: proteolysis, degradation of DNA and/or RNA templates (truncated templates will generate truncated protein products), internal initiation (if there are many methionines and internal RBS-like sequences in the gene, the ribosome may initiate translation from the wrong methionine), premature termination, translational pausing, frequent rare codon usage, complicated secondary structure of RNA, and others. This can also happen if proteins are denatured for too long, or not enough SDS was added to the 1X SDS-PAGE sample buffer.

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With a cell-free expression system, I'm getting good protein yield, but it has low biological activity. What can I do?

- Your protein may not be folding properly: try to reduce the incubation temperature to as low as 25 degrees C during synthesis.
- You may require post-translational modification of your protein: the Expressway system will not introduce post-translational modifications to the recombinant protein.
- Your synthetic protein may require co-factors for complete activity: try adding required co-factors to the protein synthesis reaction.

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