Uracil N-glicosilasa (UNG) AmpErase ™

Uracil-N-Glicosilasa (UNG) AmpErase™, parte del kit de prevención de contaminación de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) GeneAmp™, es una enzima recombinante ultrapura de 26 kDa codificada por el gen uracil-N-glicosilasa de E. coli, que se ha insertado en un huésped con E. coli para dirigir la expresión de la forma natural de la enzima. La enzima elimina cualquier uracilo incorporado en ADN monocatenario o bicatenario.

Kit de prevención de contaminación de PCR GeneAmp™
El kit de prevención de contaminación de PCR GeneAmp™ (disponible por separado) ofrece reactivos para un método sencillo pero avanzado de garantizar que los productos de PCR no se puedan volver a amplificar en amplificaciones por PCR posteriores, lo que evita resultados positivos falsos. Características de este kit:

• El método enzimático detiene la contaminación cruzada de la PCR, lo que evita resultados falsos positivos
• Se ha diseñado para degradar productos de PCR de anteriores amplificaciones por PCR sin degradar los moldes de ácido nucleico nativo, lo que mejora la amplificación
• Sin interferencia con ninguna aplicación de PCR o de PCR en tiempo real
• Se ha optimizado para su uso con reactivos básicos para PCR GeneAmp™ y sistemas de instrumentos GeneAmp™

Elimina la contaminación cruzada de PCR
El kit usa una reacción enzimática análoga a los sistemas de células de modificación-restricción y reparación-escisión para degradar específicamente productos de PCR de amplificaciones por PCR anteriores en las que se ha incorporado dUTP, sin degradar los moldes de ácido nucleico nativo. El método usado para procesar productos de PCR susceptibles de degradación implica la sustitución de dUTP por desoxitimidina trifosfato (dTTP) en la mezcla de PCR y el pretratamiento de todas las mezclas de PCR posteriores con uracil-N-glicosilasa (UNG) AmpErase™ antes de la amplificación por PCR. Los productos de amplificación por PCR contienen uracilo y se pueden distinguir con facilidad de los moldes de ADN que contienen timidina. Los productos de PCR de anteriores amplificaciones se eliminan mediante la escisión de los residuos de uracilo mediante UNG y la degradación del polinucleótido abásico resultante con calor. Aunque UNG está activo en ADN con dU monocatenario y bicatenario, los residuos de ribouracil en ARN y el propio dUTP no son sustratos para UNG. La ADN polimerasa AmpliTaq™, la ADN polimerasa AmpliTaq Gold™ y los demás componentes de la mezcla de PCR permanecen intactos durante el tratamiento de UNG, lo que proporciona una amplificación por PCR sin contaminación de productos de PCR. El producto de PCR que contiene dU se comporta como ADN que contiene dT en métodos Blot, clonación, secuenciación y otros análisis posteriores a la PCR.