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Citas y referencias (13)
Invitrogen™
Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry
Detecte apoptosis mediante citometría de flujo con ensayos de caspasa Vybrant FLICA que detectan actividades de policaspasas y caspasas 3/7/8.
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| Número de catálogo | Enzima |
|---|---|
| V35119 | Caspase 8 |
| V35117 | Poly Caspases |
| V35118 | Caspase 3/7 |
Número de catálogo V35119
Precio (CLP)
393.191
25 assays
Enzima:
Caspase 8
Precio (CLP)
393.191
25 assays
Detecte rápidamente la apoptosis mediada por caspasa mediante citometría de flujo con kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para policaspasas y caspasas 3 y 7. Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM utilizan la metodología de inhibidor fluorescente de caspasas (FLICA) para detectar la actividad de la caspasa e informar sobre ella. Específicamente, estos kits de ensayo de caspasa contienen sustratos FLICA diseñados FAM-VAD-FMOK (para policaspasas), FAM-DEVD-FMOK (para caspasas 3/7) y FAM-LETD-FMOK (para caspasa 8). También incluyen tinciones Hoechst 33342 y de yoduro de propidio, lo que permite la evaluación simultánea de la permeabilidad de la membrana y el ciclo celular mediante citometría de flujo.
Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para citometría de flujo emplean un novedoso enfoque para la detección de caspasas activas: los kits aprovechan la metodología FLICA, que es una etiqueta de afinidad. Esta etiqueta de afinidad asocia una fracción de la fluorometilcetona (FMK), que puede reaccionar covalentemente con una cisteína, con una secuencia de aminoácidos específica de la caspasa. Se utilizan diferentes secuencias de reconocimiento de aminoácidos para detectar diferentes caspasas: ácido valina-alanina-aspártico (VAD) para las policaspasas (incluidas las caspasas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 y -9), ácido aspártico-ácido glutámico-ácido valina-aspártico (DEVD) para caspasa-3/7 y leucina-ácido glutámico-treonina-ácido aspártico (LETD) para caspasa-8. Se incluye un grupo de carboxifluoresceína (FAM) como indicador.
Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de ensayo de policaspasas Vybrant FAM, ensayo de caspasas 3 y 7 y apoptosis de ensayo de caspasa 8 son 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK, 488/⁄530 FAM-DEVD-FMK y 488/⁄530 FAM-LETD-FMK, respectivamente.
Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de ensayo de policaspasas Vybrant FAM, ensayo de caspasas 3 y 7 y apoptosis de ensayo de caspasa 8 son 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK, 488/⁄530 FAM-DEVD-FMK y 488/⁄530 FAM-LETD-FMK, respectivamente.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
EnzimaCaspase 8
Excitación/emisiónFAM-LETD-FMDK: 488/530
PI: 535/617
Hoechst 33342: 350/461
PI: 535/617
Hoechst 33342: 350/461
Líneas láser del citómetro de flujoUV, 488
Para utilizar con (equipo)Citómetro de flujo
Tipo de etiquetaOtras etiquetas o colorantes
Etiqueta o tinteFAM, yoduro de propidio, Hoechst 33342
Línea de productosVybrant
Tipo de productoKit de ensayo de caspasa
Cantidad25 Assays
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Método de detecciónFluorescencia
FormatoTubo
Unit Size25 assays
Contenido y almacenamiento
1 vial de reactivo de caspasa-8 FAM-LETD-FMK (reactivo FLICA), 1 vial Hoechst 33342, 1 vial de yoduro de propidio, 1 vial de DMSO, 1 frasco de solución fijadora de apoptosis y 1 frasco de tampón de lavado de apoptosis (solución 10X). Almacenar en el refrigerador (2-8 °C) y proteger de la luz.
Citations & References (13)
Citations & References
Abstract
Galectin-3 binds to CD45 on diffuse large B-cell lymphoma cells to regulate susceptibility to cell death.
Journal:Blood
PubMed ID:23065155
Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is the most common non-Hodgkin lymphoma and an aggressive malignancy. Galectin-3 (gal-3), the only antiapoptotic member of the galectin family, is overexpressed in DLBCL. While gal-3 can localize to intracellular sites, gal-3 is secreted by DLBCL cells and binds back to the cell surface in
Reovirus infection or ectopic expression of outer capsid protein micro1 induces apoptosis independently of the cellular proapoptotic proteins Bax and Bak.
Journal:J Virol
PubMed ID:20980509
Mammalian orthoreoviruses induce apoptosis in vivo and in vitro; however, the specific mechanism by which apoptosis is induced is not fully understood. Recent studies have indicated that the reovirus outer capsid protein µ1 is the primary determinant of reovirus-induced apoptosis. Ectopically expressed µ1 induces apoptosis and localizes to intracellular membranes.
Interrelated roles for Mcl-1 and BIM in regulation of TRAIL-mediated mitochondrial apoptosis.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16478725
The current study demonstrates a novel cross-talk mechanism between the TRAIL receptor death signaling pathway and the mitochondria. This newly identified pathway is regulated at the mitochondrial outer membrane by a complex between the prosurvival Bcl-2 member, Mcl-1 and the BH3-only protein, Bim. Under non-apoptotic conditions, Bim is sequestered by
Assay of caspase activation in situ combined with probing plasma membrane integrity to detect three distinct stages of apoptosis.
Journal:J Immunol Methods
PubMed ID:12072182
Activation of cysteine-aspartic acid specific proteases (caspases) in situ, in live cells, can be detected using fluorochrome-labeled inhibitors of caspases (FLICA), the reagents that covalently bind to the active center of these enzymes. In the present study, this assay was combined with a probe of plasma membrane capacity to exclude
Interactions of fluorochrome-labeled caspase inhibitors with apoptotic cells: a caution in data interpretation.
Journal:Cytometry A
PubMed ID:12938188
BACKGROUND: Fluorochrome-labeled inhibitors of caspases (FLICA, e.g., FAM-VAD-FMK, FITC-VAD-FMK) have been designed as affinity labels of the enzyme active center of caspases Their binding by apoptotic cells was interpreted as reflecting activation of caspases. We have recently observed, however, that their binding is more complex and may involve additional mechanisms.