BaculoDirect™ C-Term Expression Kit

El sistema de expresión de baculovirus BaculoDirect™ es un potente y versátil sistema eucariótico para la expresión de proteínas de alto nivel en células de insectos. La combinación de la tecnología Gateway™ con la expresión de baculovirus hace del sistema BaculoDirect el método más rápido y fácil para la producción de baculovirus recombinante.

Cómo funciona
El ADN lineal de BaculoDirect™ (el genoma del baculovirus) está diseñado para incluir sitios de attR para una recombinación rápida y eficaz con un clon de entrada Gateway. El gen de interés se recombina del clon de entrada en el ADN lineal de BaculoDirect mediante una reacción simple de una hora de LR (Figura 1). La mezcla de reacción resultante contiene el baculovirus recombinante que transporta el gen de interés y se utiliza para transfectar células de insectos. Se elimina la necesidad de transformar bacterias y aislar un gran bácmido o cotransfectar un vector de transferencia y ADN de baculovirus lineal en células de insectos. Como resultado, el tiempo práctico se reduce considerablemente. El baculovirus purificado se puede aislar en menos de una semana.

ADN lineal Gateway
El ADN lineal de BaculoDirect está diseñado para la clonación rápida con un clon de entrada Gateway y la expresión subsiguiente en células de insectos Sf9 o Sf21. El ADN lineal incluye:

• Promotor de poliedrina fuerte para expresión de alto nivel
• Sitios R para una recombinación eficaz con cualquier vector de entrada Gateway flanqueado por attL
• Gen TK para la selección negativa utilizando ganciclovir
• Etiqueta C-terminal V5-His (kit de expresión C-terminal BaculoDirect™) o etiqueta N-terminal V5-His (kit de expresión N-terminal BaculoDirect™) para la detección con anticuerpo anti-V5 y purificación con resina quelante de níquel
• Sitio de escisión de la proteasa TEV para la eliminación de la etiqueta V5-His tras la purificación (kit de expresión N-terminal BaculoDirect)
• Gen LacZ, para garantizar la generación de una reserva de baculovirus puro, que se sustituye por su gen de interés después de la reacción recombinante de LR

Materiales adicionales necesarios, disponibles por separado: Clon de entrada Gateway.

Puede encontrar una guía de selección para elegir el vector de entrada Gateway más adecuado para su aplicación en: www.thermofisher.com/Gateway.