Pierce™ Cypridina Luciferase Glow Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Cypridina Luciferase Glow Assay Kit

Das Thermo Scientific Pierce Cypridina Luciferase Glow-Assay-Kit bietet ein extrem helles und stabiles Biolumineszenzsignal (Halbwertszeit von mehr als einer 1Weitere Informationen
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KatalognummerMenge
16171Kit für 1000 Reaktionen
16170100 Reaktionskit
Katalognummer 16171
Preis (EUR)
826,00
Each
Menge:
Kit für 1000 Reaktionen
Preis (EUR)
826,00
Each
Das Thermo Scientific Pierce Cypridina Luciferase Glow-Assay-Kit bietet ein extrem helles und stabiles Biolumineszenzsignal (Halbwertszeit von mehr als einer 1 Stunde) in Anwesenheit von Cypridina-Luziferase-Reportern.

Merkmale des Cypridina Luciferase Glow-Assay-Kits:

Empfindlich—Hochempfindlicher Nachweis von Cypridina-Luziferase-Aktivität
Sezernierte Luziferase— Ermöglicht Echtzeit-Assays und kinetische Studien ohne Zellen zu zerstören
Stabil— Reagenzien bieten eine erhöhte Signalstabilität im Vergleich zu Flash-Assays
Einfach— Erfordert kein Luminometer mit Injektoren
Kompatibel— Assay-Reagenzien mit anderen Cypridina- oder Vardula-Luziferasen
Geeignet für Automatisierungsprozesse— Für Assays mit hohem Durchsatz geeignet
Praktisch— Enthält einen universellen Zelllysepuffer und optimiertes Glow-Assay-Reagenz
Sicher— Ermöglicht die Durchführung nicht radioaktiver Assays

Dieses Pierce Luciferase Glow-Assay-Kit enthält Reagenzien zur Messung der Cypridina-Luziferase-Aktivität in Säugetierzellkulturmedien und Lysaten. Bei Verwendung mit den Thermo Scientific Cypridina Luc-Vektoren bietet das Kit ein äußerst empfindliches biolumineszentes Reporter-Assay-System für den Sekretions- oder intrazellulären Nachweis von Luziferase-Aktivität. Die Lichtleistung, die durch die Luziferase-Reaktion erzeugt wird, kann mit der Menge des produzierten Luziferase-Proteins korreliert werden, das wiederum proportional zur Aktivität des Promoters ist, der die Luziferase-Expression antreibt. Das Kit kann verwendet werden, um die Aktivität von Cypridina-Luziferasen oder -Derivaten zu erkennen, die Vargulin als Substrat verwenden.

Enthält:
Zelllysepuffer, Reaktionspuffer und Substrat

Erfordert:
Cypridina-Luziferase und Luminometer oder ein anderes Gerät zur Überwachung der Lumineszenz, wie die Thermo Scientific Luminoskan Ascent und Varioskan Flash Mikrotiterplatten-Lesegeräte.

Anwendungen:
• Promoter-Studien zur Analyse von cis-regulierenden Elementen und trans-wirkenden Faktoren
• Arzneimittelscreening
• siRNA- und miRNA-Screening
• Multiplex-Assays zur Untersuchung von Off-Target-Effekten
• Sekretionsweg-/Proteinlokalisierungsreporter-Assays
• Signaltransduktionspfadanalyse
• RNA-Spleißstudien

Die Cypridina-Luziferase ist ein 61 kDa-Protein aus dem marinen Muschelkrebs Cypridina noctiluca. Cypridina-Luziferase wird in hohem Grade in die Zellkulturmedien abgesondert und ermöglicht die Lebendzellüberwachung der Reportertätigkeit. Die mit einem Luminometer aufgenommene Lichtleistung kann mit der Menge des produzierten Cypridina-Luziferaseproteins korreliert und zur Bestimmung der Aktivität des Promoters verwendet werden, der die Cypridina-Expression antreibt. Das Cypridina-Gen in Thermo Scientific Cypridina Luc-Vektoren wurde für die Expression in Säugetierzellen modifiziert und bietet mit dem Assay-Kit ein optimales Leistungsverhalten. Das Cypridina-Glow-Reagenz liefert eine Cypridina-Luziferase-Reaktion mit Glow-Typ-Kinetik und wird für Luminometer ohne Injektoren oder für Anwendungen empfohlen, bei denen Proben Batch-weise verarbeitet werden müssen.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Specifications
AssayReporter-Enzym, Luziferase-Reporter-Assay
Kompatible ZellenSäugetierzellen
NachweisverfahrenBiolumineszierend
Zur Verwendung mit (Geräte)Luminometer (Mikrotiterplatte)
Format384-Well-Platte, 96-Well-Platte
MarkertypEnzym-markiert
ProduktliniePierce
MengeKit für 1000 Reaktionen
SubstratVargulin (Cypridina Luciferin)
SubstrateigenschaftenChemisches Substrat
SubstrattypLuziferase-Substrat
ZielLuziferase, Cypridina-Luziferase
VerfahrenVerbesserte Chemolumineszenz
TypAssay-Kit
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
• Cypridina-Glow-Assay-Puffer, 5 ml, Aufbewahrung bei 4 °C
• Vargulin (1X), 0,5 ml, Aufbewahrung bei -20 °C
• 2X Zelllysepuffer, 6 ml, Aufbewahrung bei Raumtemperatur

Nach Erhalt das Kit bei -20 °C lagern oder die einzelnen Komponenten wie oben angegeben lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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    Why am I getting a low signal in lysate using a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Can you provide some suggestions?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-optimized lysis buffer used: Assay luciferase activity in the media to confirm good expression of luciferase; Use only the provided lysis buffer.
    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I got a low signal in media when I used a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What happened?

    Here are possible causes and solutions:

    - Insufficient luciferase accumulation in media: Incubate cells for a longer time.
    - Low luciferase expression: Use less media per well during the experiment;.Use a different promoter or growth conditions to improve expression;.Increase the integration time on the instrument;.Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Treatment interfered with cellular secretory pathway: Transfect cells with a plasmid for constitutive expression of Luciferase (i.e., with pTK or pCMV promoter); Determine if luciferase actively expresses in media without treatment. Add treatment; Determine if there is a corresponding drop in luciferase activity from the constitutively expressed plasmid.

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    I am getting no signal with my Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C; maintain 100X Vargulin at -80 degrees C; Prepare new Coelenterazine Working Solution if used longer than 8 hours; Prepare new Vargulin Working Solution if used longer than 2 hours

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