Easy-Titer™ Human IgG (H+L) Assay Kit

Das Thermo Scientific Easy-Titer humanes IgG (H+L) Assay-Kit enthält Antikörper-sensibilisierte Mikrosphären zur Messung der spezifischen Konzentration von Antikörpern anhand einer einfachen und schnellen Mikroagglutinationstechnik unter Verwendung von Standard-Mikrotiterplatten und UV-Vis-Plattenlesern (Spektralphotometer). Dieses Kit ist spezifisch für humanes IgG und ist im Gegensatz zu Gesamtprotein-Assays in der Lage, spezifisch die Konzentration von Zielantikörpern in Proben (z. B. Serum, Plasma, Kulturüberstand) zu messen, die weitere Proteine enthalten. Das Kit ist empfindlich und erfordert nur sehr kleine Probenvolumina. Die Antikörperkonzentration wird aus der Assay-Reaktion (Extinktion) durch den Vergleich mit einer Standardkurve ermittelt, welche mit Verdünnungen bekannter Antikörperproben (separat erhältlich) vorbereitet wird.

Allgemeine Merkmale von Easy-Titer Antibody Assay Kits:

• Antikörperbasierte Spezifität – zur Messung der Konzentration des Zielantikörpers in einer Probe, nicht nur des Gesamtproteins; es ist nicht erforderlich, den Antikörper aufzureinigen, um seine Konzentration zu beurteilen
• Schneller und einfacher als ELIS – homogenes Assay mit drei Komponenten; Gesamtinkubationszeit von 10 Minuten
• Keine spezielle Ausrüstung erforderlich – verwendet Standard-Vortexmischer, Pipettierer, 96-Well-Mikrotiterplatten, Plattenschüttler und Lesegerät (Messung des Absorptionsvermögens bei 340 nm oder 400 nm)
• Empfindlich – Assay-Bereich (Standardkurve) 8 bis 500 ng/ml; für optimale Ergebnisse eine Probe von 15 bis 300 ng/ml verwenden
• Reproduzierbar – Variationskoeffizient < 5 %; Fehler hängt von Verdünnung und Pipettiertechnik ab
• Standard-Antikörper separat erhältlich – siehe Produktliste mit Produktempfehlungen; verwenden Sie beliebige Standard-Antikörper mit ordnungsgemäßer Zielidentität und bekannter Konzentration (größer als 10 µg/ml)
• Kits für fünf beliebte Targets— – wählen Sie ein Kit, das für eine bestimmte Immunglobulinart und -klasse spezifisch ist; keine Kreuzreaktion mit anderen Spezies und Klassen des Zielantikörpers

Easy-Titer Assay-Kits erkennen und messen spezifische Zielantikörper per Agglutination von Mikrosphären, die mit den spezifischen polyklonalen Anti-IgG- oder IgM-Antikörpern beschichtet (sensibilisiert) sind. In dem entsprechenden wässrigen Puffer (im Kit mitgeliefert) besitzen die monodispersen antikörperbeschichteten Mikrosphären (Durchmesser > 1 µm) die höchste Absorption (λ-max) bei einfallendem Licht mit einer Wellenlänge (340 nm), die etwa der Hälfte ihres Durchmessers entspricht. Wenn die Probe hinzugefügt wird, binden zwei oder mehr Mikrosphären über ihre beschichteten spezifischen polyklonalen Antikörper an jedes Antikörperziel, und diese Agglutination in effektiv größer erscheinende Kugeln führt zu einer proportionalen Abnahme der Absorptionsfähigkeit (geringere Absorption).

Typische Mikroagglutinationsassays hängen von einer Änderung der Lichtstreuung und der entsprechenden Transmissionsänderung ab, zu der die Absorption umgekehrt proportional ist. Easy-Titer Assay Kits verwenden einen speziellen Verdünnungspuffer, dessen Brechungsindex den Effekt der Lichtstreuung auf die monodispergierten Mikrosphären für die Messung der verwendeten Wellenlänge eliminiert. Aus diesem Grund muss die Probe für die Verwendung im Assay schließlich mit Hilfe des im Kit mitgelieferten Verdünnungspuffers 10- bis 20-fach verdünnt werden.

Easy-Titer Antikörper-Assays sind schneller und einfacher als ELISA:
• Die Kalibratorkonzentrationen (5 bis 500 ng/ml) durch Verdünnen des gereinigten Antikörpers mit dem Verdünnungspuffer des Kits vorbereiten.
• Proben durch mindestens 20-fache Verdünnung mit dem Verdünnungspuffer innerhalb des Messbereichs (8 bis 500 ng/ml) vorbereiten.
• Röhrchen mit Mikrokugel-Beads vortexen, um eine homogene Suspension zu gewährleisten.
• 20 µl der Bead-Suspension und jeweils 20 µl von Probe und Kalibratorkonzentration in Wells einer 96-Well-Mikrotiterplatte pipettieren.
• Mikrotiterplatte 5 min lang durch kräftiges Mischen inkubieren.
• 100 µl Blockierreagenz des Kits hinzufügen.
• Mikrotiterplatte 5 min lang durch kräftiges Mischen inkubieren.
• Absorption mit dem Standard-Plattenlesegerät (340 oder 405 nm) messen.
• Standardkurve aufzeichnen und Proben interpolieren, um die Konzentration zu ermitteln.

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