Pierce™ NHS-aktivierte Magnetic Beads

Thermo Scientific Pierce NHS-aktivierte Magnetbeads ermöglichen die kovalente, aminbasierte Konjugation von Proteinen an Magnetbeads in einem einfachen Mix-und-Go-Format für die Verwendung in kundenspezifischen Experimenten zur Affinitätsreinigung.

Merkmale von NHS-aktivierten Magnetbeads:

• Hohe Kapazität – mindestens viermal höhere Bindungskapazität als NHS-aktivierte magnetische Beads von anderen Anbietern
• Anwenderfreundlich – Immobilisieren in einer einfachen, einstufigen Reaktion mit minimalem Arbeitsaufwand
• Sicher – Keine Gefahrstoffe erforderlich (wie z. B. Natriumcyanoborhydrid und Bromcyan)
• Ligand-kompatibel – Zur Immobilisierung mit fast jeder primären aminhaltigen Verbindung oder jedem Affinitätsliganden
• Geringfügige nicht-spezifische Bindungskapazität – Die Bead-Oberfläche ist vorblockiert und alle nicht umgesetzten NHS-Ester-Gruppen sind vollständig gequencht
• Protokoll-kompatibel – Protein-Kopplung an die Beads und nachgeschaltete Anwendungen können manuell oder automatisiert (z. B. Thermo Scientific KingFisher Geräte) durchgeführt werden

Die aktivierten magnetischen Beads enthalten funktionale N-Hydroxysuccinimid(NHS)-Gruppen, die mit primären Aminen reagieren und stabile Amidverbindungen bilden. Nach ihrer kovalenten Bindung sind die immobilisierten Proteine sehr beständig gegen Auslaugen von der Bead-Oberfläche. Bei der Verwendung von vorbereiteten Beads in Experimenten ist die unspezifische Bindung vernachlässigbar, da nicht umgesetzte NHS-Estergruppen während des Kupplungsverfahrens gründlich blockiert werden. Pierce NHS-aktivierte Magnetbeads können manuell mit einem magnetischen Stativ oder mit automatisierten Plattform wie Thermo Scientific KingFisher Geräten gekoppelt und verarbeitet werden.

Anwendungen:
• Immobilisierung von Liganden zur Aufreinigung rekombinanter Proteine
• Immobilisierung von Antikörpern für Immunpräzipitationen und Co-Immunpräzipitationen frei von Antikörperkontamination in den Eluaten
• Immobilisierung von Sekundärantikörpern zur Affinitätsreinigung von Antikörpersubtypen aus Aszites, Serum und Zellkulturüberstand

Pierce NHS-Activated Magnetic Beads bieten eine bequeme Möglichkeit, beliebige Proteine an eine Magnet-Bead-Oberfläche zu konjugieren. Für das Verfahren sind keine gefährlichen Chemikalien oder langwierigen Reaktionsschemata erforderlich. Die Beads werden zunächst bei pH 7 bis 9 in einem aminfreien Puffer für 1 bis 2 Stunden mit Protein inkubiert, um mithilfe der NHS-Ester-Chemie eine kovalente Kopplung zu ermöglichen. Anschließend werden die Beads gewaschen und danach alle verbleibenden aktiven NHS-Ester-Gruppen gequencht. Die aminreaktive Chemie und das anschließende Quenching sind in 3 bis 4 Stunden abgeschlossen. Es erfolgt kein Auslaugen des gekoppelten Proteins von der Oberfläche der Beads. Darüber hinaus weisen die Beads aufgrund der effektiven Quenchung und des firmeneigenen Blockierungsmittels, das die Oberfläche des Basispartikels bedeckt, eine sehr geringe unspezifische Bindung auf. Nach der Konjugation werden die präparierten Magnet-Beads in der Regel in Affinitätsreinigungsverfahren verwendet.