Pierce™ Biotin 3' End DNA Labeling Kit

Das Thermo Scientific Pierce Biotin 3'-End-DNA-Markierungskit dient zur Kennzeichnung einsträngiger DNA-Primer mit Biotin für die Verwendung bei nicht radioaktiven, elektrophoretischen Mobilität-Shift-Assays (EMSA) und anderen Nukleinsäure-Nachweismethoden.

Das DNA-Biotinylierungsverfahren verwendet terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT) für die Katalysierung einer nicht auf Matritzen abzielenden Nukleotid-Integration in das 3'-OH-Ende einsträngiger DNA. TdT weist eine Substratpräferenz für einsträngige DNA auf, markiert aber Duplex-DNA mit 3'-Überhängen und stumpfen Duplexen, wenn auch mit einer geringeren Effizienz.

Merkmale des Biotin 3'-End-DNA-Markierungskits:

• Die nicht isotopische Markierung eliminiert den Aufwand an gefährlichen radioaktiven Materialien oder schwer zu entsorgenden Abfall
• 1–3 biotinylierte Ribonukleotide am 3'-Ende der DNA-Stränge für eine geringere Beeinträchtigung der Hybridisierung oder sequenzspezifischen Bindung von Proteinen
• Biotin-markierte Sonden sind länger als ein Jahr stabil
• 30-minütiges Markierungsverfahren ist schnell und effizient

Das Biotin 3'-End-DNA-Markierungskit wurde optimiert, um 1–3 biotinylierte Ribonukleotide (Biotin-11-UTP) auf das 3'-Ende von DNA-Strängen zu integrieren. Diese Markierungsstrategie hat den Vorteil, dass das Biotin am 3'-Ende der Sonde lokalisiert wird, wo es weniger wahrscheinlich ist, die Hybridisierung oder sequenzspezifische Bindung von Proteinen zu beeinträchtigen. Biotin-markierte DNA-Sonden können den nicht isotopischen Nachweis in einer Vielzahl von Anwendungen erleichtern, darunter elektrophoretische Mobilität-Shift-Assays (EMSA), Northern- oder Southern-Blots, Kolonie-Hybridisierungen oder In-situ-Hybridisierungen.