Los kits y reactivos de etiquetado de masas isobáricas Thermo Scientific TMT™ reactivos a las aminas permiten la cuantificación multiplex de proteínas extraídas de células y tejidos mediante espectrometría de masas en tándem.

Los reactivos Tandem Mass Tag™ 6-plex (TMTsixplex™) son conjuntos de compuestos isobáricos (es decir, la misma masa y estructura, también llamados isómeros isotópicos) que son activados por NHS para el etiquetado covalente e irreversible de los grupos de aminas primarias (–NH2). Cada reactivo isobárico contiene un número diferente de isótopos pesados en la región indicadora de masas, lo que resulta en una masa indicadora única durante el tándem de MS/MS para la identificación de muestras y la cuantificación relativa. Los reactivos etiquetan todos los péptidos preparados a partir de muestras de células o tejidos para el análisis de dos muestras en un solo análisis de MS.

Características del conjunto de etiquetado TMTsixplex:

• Potente: el análisis simultáneo de MS de varias muestras aumenta el rendimiento de las muestras y permite la cuantificación relativa de hasta seis muestras diferentes derivadas de células, tejidos o fluidos biológicos.
• Consistente: la estructura y el rendimiento idénticos de los reactivos TMTzero™, TMTduplex™, TMTsixplex™ y TMT10plex™ permite una transición eficaz del desarrollo de métodos a la cuantificación multiplex, lo que facilita la investigación de descubrimiento de biomarcadores en plataformas y conjuntos de datos.
• Robusto:c el uso de sustancias químicas con propiedades idénticas permite pasar de forma eficaz de un método de desarrollo a una cuantificación multiplex, lo que hace viable una investigación sobre la activación de biomarcadores.
• Eficaz: los reactivos activados por éster NHS reactivos a las aminas garantizan un etiquetado eficaz de todos los péptidos, independientemente de la secuencia de proteínas o de la especificidad de enzimas proteolíticas.
• Compatible: optimizado para su uso con plataformas de Thermo Scientific MS/MS de alta resolución, como los instrumentos Q Exactive, Orbitrap Elite™ y Orbitrap Fusion™ Tribrid™ con análisis de datos totalmente compatibles con Proteome Discoverer™ 1.0 y versiones posteriores.

Aplicaciones:
• Identificación y cuantificación de proteínas a partir de múltiples muestras de células, fluidos tisulares o biológicos
• Perfil de expresión de proteínas de estados normal frente a estado con enfermedad o de control frente a tratado
• Medición de hasta seis muestras diferentes simultáneamente en un solo experimento
• Análisis cuantitativo de proteínas para las que no hay anticuerpos disponibles
• Identificación y cuantificación de proteínas de membranas modificadas después de la traslación
• Identificación y cuantificación de cientos a miles de proteínas en un solo experimento

Los cambios en la expresión de las proteínas y las modificaciones postraslacionales son mecanismos esenciales de regulación biológica y de enfermedad. Actualmente, los avances en cromatografía líquida (LC), en la instrumentación de espectrometría de masas (MS) y en bioinformática permiten a los investigadores identificar miles de proteínas en una muestra en particular con un alto grado de fiabilidad.  Sin embargo, la detección y cuantificación reproducibles de diferentes proteínas dentro de las muestras mediante espectrometría de masas es un reto debido a la variabilidad en la separación, la ionización y la detección de péptidos.

Los reactivos Tandem Mass Tag (TMT) son etiquetas químicas que permiten la identificación y cuantificación de proteínas en diferentes muestras mediante espectrometría de masas en tándem. Los compuestos reactivos a la amina y los compuestos activados por éster NHS se unen covalentemente al extremo amino de los péptidos y al extremo amino libre de los residuos de lisina de péptidos y proteínas con alta eficiencia, de modo que etiquetan todos los péptidos en una muestra independientemente de la enzima utilizada para la digestión. Dado que los reactivos TMT comparten una estructura y masa idénticas (es decir, son isotopómeros), los péptidos etiquetados se coeluyen durante la separación de LC y se coaíslan durante el análisis de MS/MS. Gracias a esto, faltarán menos identificaciones de péptidos entre las muestras. Durante el análisis de MS/MS, cada etiqueta isobárica también se fragmenta para producir una masa iónica de informador única que se utiliza para la identificación y cuantificación de muestras. La cuantificación de proteínas se logra comparando las intensidades relativas de los seis iones informadores en los espectros MS/MS.

La familia de reactivos de etiqueta de masa en tándem (TMT) consta de conjuntos TMTzero, TMTduplex, TMTsixplex y TMT10plex diseñados especialmente para permitir una transición rápida y rentable del desarrollo de métodos a la cuantificación de proteínas de alto rendimiento. La etiqueta TMTzero permite realizar pruebas y optimizar la preparación, el etiquetado, el fraccionamiento y la fragmentación mediante MS de las muestras para identificar péptidos y detectar indicadores sin necesidad de utilizar los compuestos etiquetados isotópicos más costosos. El juego de reactivos TMTsixplex permite la creación de perfiles de proteínas de seis complejos para varias condiciones, como ciclos de tiempo, respuestas de dosis, réplicas o comparaciones de varias muestras. Cada etiqueta TMT se basa en la misma estructura química, lo que elimina la necesidad de modificar las condiciones de etiquetado o de separación de HPLC entre experimentos.

Los reactivos TMT se proporcionan como conjuntos independientes o en kits optimizados que contienen todos los reactivos y controles necesarios para obtener la máxima flexibilidad, comodidad y fiabilidad. Los reactivos de etiquetado de masas isobáricas combinados con los instrumentos y el software de Thermo Scientific, líderes en el sector, proporcionan soluciones totales integradas para el análisis de expresión cuantitativa de proteínas.

Más datos del producto
• Generación de perfiles cuantitativos de fosfoproteínas de células madre del cáncer

Productos relacionados
Kit de etiquetado de masas isobáricas TMTsixplex™

Para el análisis de alta resolución de los péptidos marcados con TMT, la columna LC recomendada para la fuente de Nanospray Flex es la columna LC Acclaim PepMap 100 C18 (n.º cat. 164942 o 164939). Para la fuente EASY-Spray, la columna LC recomendada es la columna LC Easy-Spray C18 (n.º de ref. cat. ES802 o ES803)