Alexa Fluor™ 700 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ 700 ist ein heller und photostabiler Nahinfrarot-Farbstoff, der mit einer Xenon-Lichtbogenlampe, dunkelroten Diodenlasern oder gepumpten Farbstofflasern, die im 675–700 nm-Bereich funktionieren, angeregt werden kann. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 700 ist wasserlöslich und pH-unempfindlich im Bereich von pH 4 bis pH 10 und wird für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet. Die Fluoreszenz dieses langwelligen Alexa Fluor™ Farbstoffs ist für das menschliche Auge unsichtbar, wird jedoch von den meisten Bildgebungssystemen leicht erkannt. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den Alexa Fluor™ 700 Farbstoff konjugiert mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Tracern und Amplifikationssubstraten, die für die Markierung und Detektion von Zellen optimiert wurden, an. Der NHS-Ester (oder Succinimidylester) von Alexa Fluor™ 700 ist das beliebteste Hilfsmittel für die Konjugierung dieses Farbstoffs mit einem Protein oder Antikörper. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH₂) von Proteinen, Amin-modifizierten Oligonukleotiden und weiteren Amin-haltigen Molekülen verwendet werden. Das entstehende Konjugat mit Alexa Fluor™ weist eine hellere Fluoreszenz und höhere Fotostabilität als Konjugate mit anderen Fluorophoren mit ähnlichem Spektrum auf.

Ausführliche Informationen zu diesem Alexa Fluor™ NHS-Ester:

Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 700 Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, aminmodifizierte Oligonukleotide
Anregungs-/Emissionsmaxima (Ex/Em) des Konjugats: 702/723 nm
Extinktionskoeffizient: 205.000 cm-1M-1
Molekulargewicht: ∼1400

Typische Konjugationsreaktion
Amin-reaktive Farbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das bereitgestellte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Sie können die Reaktion auf beliebige Proteinmengen skalieren, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden, für die drei unterschiedliche molare Verhältnisse von reaktivem Reagenz zu Protein verwendet werden.

Der Alexa Fluor™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1 – 0,2 M-Natriumbicarbonat-Puffer, pH 8,3, bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysins, erreichen Sie möglicherweise eine stärker selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugat-Aufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder Ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Aufreinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 – 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 – 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 – 100 μg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierungskits, oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Markierungskits finden Sie unter Protein- und Nukleinsäuremarkierungskits—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™ Handbuch.

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