EnzChek™ Direct Phospholipase C Assay Kit

Este kit proporciona una supervisión continua de la actividad de fosfolipasa C específica de fosfotidil colina (PLC) en ensayos bioquímicos basados en microplacas. El ensayo utiliza un sustrato fluorogénico selectivo de PCL que emite una emisión verde brillante tras la escisión.

El kit de ensayo de fosfolipasa C directa EnzChek™ proporciona un método simple y sólido para supervisar la actividad de PC-PLC. Cada kit proporciona suficientes reactivos para 2 microplacas, utilizando volúmenes de 200 µl en formato de 96 pocillos. El PC-PLC desempeña un papel fundamental en muchas vías de señalización celular involucradas en la apoptosis y la supervivencia celular, así como en enfermedades que van desde el cáncer hasta el VIH1-7. El ensayo utiliza una glicerofosfoetanolamina con una cadena de acilo sn-2 etiquetada con colorante como sustrato para PC-PLC. Escisión del sustrato por PC-PLC antes de que el fosfato libere el diacilglicerol etiquetado con colorante, que produce una señal de fluorescencia positiva que puede medirse continuamente. El producto de reacción tiene un máximo de absorción y emisión de fluorescencia de 509 nm y 516 nm, respectivamente. Con una enzima purificada de Bacillus cereus, el ensayo puede detectar tan solo 10 mU⁄ml de PC-PLC después de una hora a temperatura ambiente. Se ha demostrado que el kit es útil para caracterizar la inhibición de PC-PLC y, dado que ofrece una medición directa, se elimina la posibilidad de falsos positivos en una pantalla compuesta.