T-REx™ Complete Kit, with pcDNA™4/TO^© Vector

Sistema de expresión regulado por tetraciclina sin transactivadores virales
El sistema T-REx™
produce niveles más altos de expresión inducida que cualquier otro sistema de expresión de mamíferos regulado. Utiliza el promotor de CMV completo y añade elementos de control al operón de resistencia bacteriana a la tetraciclina para reprimir eficazmente y volver a reprimir la transcripción de una de las secuencias promotoras de mamíferos más fuertes que se conocen (1,2).

Activación específica
El sistema T-REx ™ utiliza un mecanismo represor que bloquea la transcripción del poderoso promotor del CMV en ausencia de tetraciclina. Debido a que los elementos del sistema T-REx™ no utilizan transactivadores virales, puede lograr una expresión de alto nivel a partir de un promotor de CMV completo sin la activación secundaria y no específica de los genes anfitriones.

Mecanismo T-REx™
Los elementos de control transcripcional T-REx™ se suministran a través de dos secuencias de operador de tetraciclina (TetO₂) insertadas entre la caja TATA del promotor de CMV y el sitio de inicio transcripcional. La secuencia de TetO₂ en sí no tiene efecto en la expresión. Cuando la proteína represora de tetraciclina (TR) está presente, se une eficazmente a los sitios de TetO₂ y bloquea el inicio de la transcripción La tetraciclina añadida al medio de cultivo se une a la proteína TR y cambia su conformación. Este cambio hace que la proteína TR libere los sitios de TetO₂, lo que reduce la transcripción del promotor del CMV. El resultado es una expresión de alto nivel del gen de interés. Los niveles de expresión se pueden modular en función de la concentración de tetraciclina y pueden inducirse a niveles que se logran con vectores de expresión CMV constitutiva. T-REx™ es un potente sistema de expresión de mamíferos inducible que permite regular la expresión de un potenciador-promotor del citomegalovirus (CMV) humano completo.
Los vectores de expresión inducibles
T-REx™ tienen las siguientes características:

• Secuencia completa del potenciador-promotor de CMV que contiene dos copias de la secuencia de operador de tetraciclina TetO₂ para una expresión regulada de alto nivel
• Zeocin™ o el gen de resistencia a la higromicina para la selección eficaz de líneas celulares de mamíferos estables
• Sitio de clonación múltiple de gran tamaño para simplificar la clonación

Además, pcDNA™4/TO/myc-His ofrece un epítopo c-myc para una detección rápida de proteínas recombinantes con un anticuerpo Anti-myc y una secuencia de polihistidina (6xHis) para una purificación sencilla de la proteína recombinante con resina quelante de níquel y una detección con el anticuerpo Anti- His(C-terminal).

Vector regulador, pcDNA™6/TR, proporcionado para la expresión de alto nivel de la proteína represora de tetraciclina (TR). Este vector expresa el gen de resistencia a la blasticidina para una selección rápida de líneas celulares de mamíferos que expresan la proteína TR de forma estable.