Kit de clonage par PCR CloneJET™ avec cellules compétentes DH10B

Cet emballage comprend le kit de clonage par PCR CloneJET (20 ou 40 réactions) et les cellules compétentes DH10B optimisés pour une utilisation avec le kit et pouvant être directement transformées avec le produit de ligature.

Kit de clonage par PCR CloneJET
Le kit de clonage par PCR Thermo Scientific CloneJET est un système de sélection positive avancé pour le clonage à haute efficacité des produits PCR générés avec toute ADN polymérase thermostable. Tout fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné. Le kit fonctionne bien avec des fragments d’ADN phosphorylés et non phosphorylés. La ligature dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que cinq minutes, et son rendement est de plus de 99 % de clones recombinants. Les produits de PCR à extrémités franches générés par une enzyme de correction sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage.

Les produits de PCR générés soit avec des ADN polymérases sans activité corrective, soit avec des mélanges d’ADN polymérases doivent être décolorés avant ligature en une réaction de cinq minutes avec l’enzyme thermostable de mélange d’ADN fourni avec le kit. Les cellules compétentes DH10B sont optimisées pour une utilisation avec le kit de clonage par PCR CloneJET et peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.

Le kit de clonage par PCR CloneJET contient le nouveau vecteur de clonage de sélection positive prêt à l’emploi pJET1,2 / blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules recircularisées du vecteur pJET1,2 / blunt auxquelles il manque un insert expriment une enzyme de restriction létale qui tue la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc.

• Rapide—Clonage par PCR en seulement cinq minutes
• Efficacité optimale—>99 % de clones positifs
• Pas de bruit de fond de clonage—vecteur à sélection positive
• Polyvalent—convient parfaitement au clonage à extrémités franches ou adhérentes
• Économique—pas d’analyse coûteuse de bleu / blanc

Les applications incluent :
• Clonage de produits issus de la PCR à extrémités franches ou à queue 3’ dA jusqu’à 10 kb
• Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction
• Séquençage d’ADN cloné
• Transcription in vitro et in vivo d’inserts clonés du promoteur T7

Pour en savoir plus sur le kit de clonage par PCR CloneJET ›

Cellules compétentes DH10B
Les cellules compétentes DH10B Thermo Scientific sont des cellules E. coli chimiquement compétentes à haute efficacité. La souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant ainsi de cloner efficacement l’ADN génomique procaryote et eucaryote. Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides. Génotype : F : mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ : rpsL(StrR) nupG.

• Haute efficacité de transformation : ADN pUC19 >1 x 109 cfu/µg
• Convient pour les applications courantes et à haut débit de clonage
• Deux réactions par emballage de flacons
• S.O.C. Milieu d’excroissance inclus

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