Sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Pol II miR

El sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Poll II miR combina la
tecnología de ARNi BLOCK-iT™ Pol II miR de Invitrogen y la tecnología lentiviral ViraPower™ para facilitar la creación de un
lentivirus incompetente para la replicación que ofrezca una secuencia de
microARN (miARN) de interés para células de
mamíferos con y sin división para el análisis de interferencia de ARN (ARNi), ensanchando así las posibles aplicaciones de RNAi
más allá de las de otros
sistemas retrovirales tradicionales (Naldini, 1998).

El sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Pol II miR incluye:
o Un kit de vectores de expresión de ARNi BLOCK-iT™ Pol II miR para la producción de un clon de
expresión que contiene un oligonucleótido bicatenario que codifica una secuencia de pre-miARN para la expresión en células de mamíferos. El vector de expresión de ARNi BLOCK-iT™ Pol II miR (pcDNA™6.2-GW/miR) proporciona una forma rápida y eficaz de clonar dúplex de oligonucleótidos bc que codifican una secuencia de diana de miARN deseada en un vector que contiene un promotor de Pol II (CMV) para su uso en análisis de ARNi. El vector de expresión de ARNi BLOCK-iT™ Pol II miR está diseñado específicamente para
permitir la expresión de secuencias de miARN y contener secuencias
de flanqueo miR específicas que permiten el procesamiento adecuado del miARN.
El vector pDONR™ 221 sirve para transferir el casete de expresión de pre-miAR
al plásmido de expresión lentiviral mediante tecnología Gateway™. La tecnología Gateway™ es un método de clonación universal que aprovecha las propiedades de recombinación específicas del sitio del bacteriófago lambda (Landy, 1989) para proporcionar una forma rápida y altamente eficaz de mover su secuencia de ADN de interés a múltiples sistemas vectoriales.
o Un vector de destino pLenti6/V5-DEST en el que se transfiere el casete
de pre-miARN del clon de expresión mediante la tecnología Gateway™. Este plásmido de expresión contiene elementos que permiten el envasado de la construcción en viriones y el marcador de resistencia a la blasticidina para la selección de líneas celulares transducidas de forma estable.
o Mezclas de enzimas Gateway™ BP y LR Clonase™ II que facilitan la transferencia
del casete de expresión premiARN desde el vector de expresión al vector de destino
pLenti6/V5-DEST.
o Componentes del sistema lentiviral ViraPower™ para la producción de un
lentivirus incompetente para la replicación que expresa de forma estable el miARN
de interés en las células de mamíferos con y sin división. La tecnología lentiviral ViraPower™ facilita la administración altamente eficiente, in vitro o in vivo de un gen o ARN diana a células de mamíferos con y sin división mediante un lentivirus incompetente en la replicación. Basado en el sistema lentikat™ desarrollado por Cell Genesys (Dull et al., 1998), la tecnología lentiviral ViraPower™ posee características que mejoran su bioseguridad al tiempo que permite una expresión de alto nivel en una gama más amplia de tipos de células que los sistemas retrovirales tradicionales.