二光子励起顕微鏡（Two Photon Excitation Microscopy；TPE）

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標識およびバイオコンジュゲート

Molecular Probes®の蛍光色素は、TPEアプリケーションにおいて、抗体、タンパク質、デキストラン、および他の生体分子とのコンジュゲートとして、十分に試験されています。下記のリストをご利用になり、最適な波長を持つ蛍光色素をお選びください。TPE励起波長は表に示されています。各色素の引用文献リストもございます。一般的に、細胞骨格の構成を調べるまたはニューロントレーシングを行う実験においては、TPE向けにAlexa Fluor®色素がバイオコンジュゲートとして使われてきました。抗体にコンジュゲートされたQdot®プローブは、免疫組織化学による解析に用いられてきました。各蛍光色素のリンクをたどると、目的の分子をターゲットするにあたり、現在利用可能な各バイオコンジュゲート全てを見ることができます。リストは、抗体およびファロイジンから成長因子およびレクチンにまで及びます。お探しのコンジュゲートがリストにない場合は、ご自分でバイオコンジュゲート プローブを作成するための反応性色素または最適な標識キットをリンク先でご紹介しています。

イオンインジケーター

TPEアプリケーションにおいて、主に神経細胞に対して様々なMolecular Probes®イオンインジケーターが使用されてきました。Oregon Green® 488 BAPTA-1は、ラットの脳におけるカルシウムシグナルのイメージングに使用されており、fura-2およびX-rhod-1はプルキンエ細胞において使用され、またFluo-5Fは樹上突起および樹状突起棘に関する論文に引用されています。他のイオンでは、SBFIを用いてラット心筋細胞におけるナトリウム勾配、MQAEを用いて嗅覚神経細胞における塩素濃度などがTPEで解析されています。

下記の表はTPEで使用される蛍光プローブを示しています。また、通常のイメージングアプリケーションにおけるパフォーマンスに基づいてまとめられた、より幅広いイオンインジケーターもご覧いただけます。

酸化ストレスの検出

TPEでは、様々な蛍光プローブを使用し、活性酸素種の局所的な放出および細胞の酸化還元状態を検出することができます。特に、グルタチオン、H₂O₂、または全般的な酸化ストレスの測定には、TPEでよく機能することが示されていて、幅広い範囲から波長を選択できる多数のプローブを用いることができます。各プローブに関する引用文献と共に、使用されたTPE励起波長もまとめてあります。

下記の表はTPEで使用される蛍光プローブを示しています。また、通常のイメージングアプリケーションにおけるパフォーマンスに基づいてまとめられた、より幅広い活性酸素指示薬 もご覧いただけます。

細胞構造用プローブ

細胞構造用プローブは、核染色試薬、膜染色試薬、および細胞トレーシング色素などがTPEで良好な結果を示しています。核染色試薬は生細胞用（Hoechst 33342）および固定後細胞用（DAPI）のものがあり、どちらも青色の蛍光を発し、似たようなTPE励起波長を持ちます。細胞膜用プローブは、赤色（FM® 1-43色素）または遠赤（DiD）励起光を選択でき、細胞トラッキング用の色素は緑色から橙色までがあります。

下記の表はTPEに用いられるプローブを示しており、引用文献およびTPE励起波長も記してあります。また、通常のイメージングアプリケーションにおけるパフォーマンスに基づいてまとめられた、より幅広い細胞構造プローブもご覧いただけます。