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特殊RNA分离(mRNA,miRNA,病毒RNA)

  • 沉淀miRNA:根据mirVANA™ miRNA Isolation试剂盒或mirVANA™ PARIS™试剂盒的说明进行操作。
  • 两次酚/胍(离液试剂)提取:使用酚/胍盐裂解组织,然后用酚提取,离心,取上清,并沉淀RNA。
  • 玻璃纤维过滤:使用离液剂裂解组织,将RNA结合在玻璃纤维膜上,然后洗涤除去未结合的DNA/蛋白/盐/核苷酸,然后洗脱RNA。

您需要在提取前将病毒从细胞中分离出来,以避免样品中细胞核酸的污染。

提取的RNA量本身就比较少,或者在乙醇沉淀过程中将RNA沉淀丢失,都可能导致RNA产量低。另外,不同组织的RNA含量不同,RNA的产量取决于样本的种类。

这一问题的出现可能有以下几个原因:

  • 总RNA量过多:请检查你使用的总RNA的量(我们建议使用2至10 µg总RNA)。
  • 磁珠或探针量使用不足:请使用推荐用量的探针或磁珠。
  • 操作或干燥磁珠时没有正确操作:请根据推荐的操作指南对磁珠进行洗涤/混匀,不要让磁珠过度干燥。

在使用RiboMinus™试剂盒分离纯化RNA前,使用DNaseI消化总RNA样品,以除去基因组DNA的污染。

自动化RNA提取

将软布或纸巾用温和的去垢剂、肥皂水或酒精润湿,然后擦拭磁力棒。

如果没有向磁棒套架插入磁棒套则程序不会开始运行。

如果起始材料过于粘稠,磁力棒将不能完全吸取磁珠。可以尝试稀释样本,并检查样本是否使用正确的方法进行匀浆及裂解。

这种情况有时会发生,但是这不会影响产量,因为样本已经从磁珠上被洗脱下来了。

一个可能的原因是塑料的磁棒套由于其本身的设计稍有弯曲。这也是为什么磁棒套是成对包装的,以保持它们的形状。您可以手动调整磁棒套主板的弯曲度,并再试一次。

关闭机器,然后检查仪器是否有可见的损伤。确保正在运行的实验程序使用的是正确的磁头。如果机器没有可见的损伤,请重新打开机器。这时,机器将会重置。如果问题又立即重新出现,则将机器关闭,并将磁头轻轻移到它移动路径的中央,然后再次重启机器。如果问题仍然出现,请拨打客服电话,联系重置磁力棒。

很不幸,磁珠被冷冻后,将失去结合RNA的能力,不能继续使用。

请按照下列建议步骤处理:

  1. 按下键盘上的ESC键回到主屏幕。
  2. 选择“1”进入手动屏幕。
  3. 选择“2”将枪头归位到固定器中。仪器也会将所有轴线返回初始位置。
  4. 关闭机器,取出程序卡并重新插入,重启机器,然后在没有试剂的情况下运行实验程序。

    如果同样的错误代码仍然出现,请尝试以下操作:

    关闭机器,取出程序卡并重新插入,重启机器,在手动菜单下,选择“2”,返还枪头。然后在没有试剂的情况下运行实验程序。

将软布或纸巾用温和的去垢剂、肥皂水或酒精润湿,然后擦拭磁力棒。

如果没有向磁棒套架插入磁棒套,则程序不会开始运行。

如果起始材料过于粘稠,那么磁力棒将不能完全吸取磁珠。可以尝试稀释样本,并检查样本是否使用正确的方法进行匀浆及裂解;向样本内加入少量去垢剂也可以提高磁珠的回收率;还可以对样品板进行快速离心,使磁珠沉积在板的底部,以提高磁珠的回收率。

这种情况有时会发生,但是这不会影响产量,因为样本已经从磁珠上被洗脱下来了。

不能,一旦实验程序停止,它将从头重新开始运行。您可以使用磁力架手动完成剩下的提取程序,或者从实验停止的步骤开始重新创建一个修改版的KingFisher™ Flex实验程序并运行该程序。

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