Sulfo-LC-SDA (Sulfo-NHS-LC-Diazirine) (sulfosuccinimidyl 6-(4,4'-azipentanamido)hexanoate)

Thermo Scientific Pierce Sulfo-LC-SDA (Sulfo-NHS-LC-Diazirin) kombiniert bewährte NHS-Ester- und Diazirin-basierte Lichtreaktionschemien mit Konjugat aminhaltiger Moleküle mit jeder anderen funktionellen Gruppe über eine langwellige UV-Lichtaktivierung. Ein 12,5 Å Spacerarm trennt die beiden photoreaktiven Gruppen.

Merkmale von Sulfo-SDA (Sulfo-NHS-LC-Diazirin):

• Wasserlöslich—Löslichkeit in wässrigen Lösungen verbessert durch eine Sulfonatgruppe
• Heterobifunktional—NHS-Estergruppe reagiert mit primären Aminen bei pH 7 bis 9 und bildet kovalente Amidbindungen Diazirin (Azipentanoat) reagiert effizient mit jeder Aminosäure-Seitenkette oder Peptidrückgrat bei Aktivierung mit langwelligem UV-Licht (330 bis -370 nm)
• Kontrollierbar—Chemische zweistufige Vernetzung wird mit gängigen Labor-UV-Lampen aktiviert
• Einfache Verwendung—Diese Crosslinker sind lichtbeständig unter typischen Laborbeleuchtungsbedingungen, sodass es nicht notwendig ist, Experimente im Dunkeln durchzuführen
• Besser als Arylazid—Die Diazirin-lichtreaktive Gruppe hat eine bessere Lichtbeständigkeit in normalem Licht als Phenyl-Azid-Gruppen von traditionellen lichtreaktiven Crosslinkern, aber die Diazirin-Gruppe wird effizienter durch langwelliges UV-Licht aktiviert

Succinimidyldiazirin (SDA) Reagenzien sind eine neue Klasse von Crosslinkern, die eine bewährte aminreaktive Chemie mit einer innovativen und effizienten Diazirin-Photochemie für die Konjugation aminhaltiger Moleküle mit nahezu jeder anderen funktionellen Gruppe verbinden. Die SDA-Crosslinker umfassen sechs Verbindungen, die sich durch die Längen der Spacerarme unterscheiden, sowie durch die Fähigkeit, die vernetzten Proteine zu spalten und das Vorhandensein oder Fehlen einer geladenen Gruppe für die Membrandurchlässigkeit. Die Proteinvernetzung ist eine wichtige Technik, die zum Verständnis der Proteinstruktur und zur Stabilisierung von Protein-Protein-Interaktionen verwendet wird. Diese SDA-Reagenzien erweitern die Effizienz und den Bereich der Interaktionen, die mit diesem Ansatz untersucht werden können.

Typische bifunktionale Amin- oder Sulfhydryl-reaktive Crosslinker erfordern spezifische Aminosäuregruppen (z. B. Lysin oder Cystein) in der richtigen Entfernung auf beiden Proteinen, um Proteininteraktionen zu erfassen. Die SDA-Crosslinker umgehen diese Einschränkung, indem sie die spezifische Markierung eines Proteins mit dem aminreaktiven N-Hydroxysuccinimidester (NHS) ermöglichen, gefolgt von UV-aktivierter Vernetzung über den Diazirin-Anteil zu jeder Aminosäure-Seitenkette oder Peptid-Backbones eines zweiten Proteins. Diazirin-basierte Photocrosslinker haben eine bessere Lichtbeständigkeit als Phenylazid-basierte Photocrosslinker und können mit langwelligen UV-Licht (330 bis 370 nm) einfach aktiviert werden.

Mehrere Diazirin-Crosslinker verfügbar
Die NHS-Ester Diazirin-Derivate (SDA, LC-SDA und SDAD) verfügen über keine geladene Gruppe und sind membrandurchlässig. Diese Eigenschaft macht sie ideal für intrazelluläre und intramembrane Konjugationen. Sulfo-SDA, Sulfo-LC-SDA und Sulfo-SDAD enthalten dagegen negativ geladene Sulfat-Gruppen, die ihre Wasserlöslichkeit verbessern und die Permeabilität der Zellmembran verringern, wodurch sie für die Vernetzung extrazellulärer Proteine eingesetzt werden können. SDAD und Sulfo-SDAD haben auch eine Disulfid-Bindung innerhalb des Distanzstücks, die mit Reduktionsmitteln gespalten werden kann.

• Kurze (3,9Å) und lange (12,5Å) Spacerarm-Varianten
• Membrandurchlässige (NHS) und undurchlässige (Sulfo-NHS) Varianten
• Nicht-spaltbare und spaltbare (Disulfid-Spacer) Varianten

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