Kit de sustrato de DAB Pierce™

El kit de sustrato DAB Thermo Scientific Pierce permite la detección cromogénica de la actividad de peroxidasa de rábano (HRP) basada en la acción de 3,3'-diaminobenzidina (DAB) en métodos de tinción de Western blot y tejidos.

DAB (tetrahidrocloruro de 3,3'-diaminobenzidina; MW = 214,1) reacciona con HRP en presencia de peróxido para producir un producto insoluble de color marrón en lugares donde los anticuerpos conjugados con peroxidasa están ligados a las muestras. El precipitado marrón es insoluble en alcohol y otros disolventes orgánicos, convirtiéndolo en un sustrato excelente para la tinción inmunohistoquímica que requiere el uso de contratinciones y medios de montaje tradicionales. El kit de sustrato DAB Pierce incluye una solución 10X de DAB y tampón de sustrato de peróxido estable. También está disponible el DAB cristalino (polvo).

Características del sustrato DAB:

• Sustrato HRP: para la detección de actividad de la peroxidasa de rábano en medios sólidos, incluidas membranas de nitrocelulosa y PVDF, así como muestras de tejido fijado
• Cromogénico: no se necesita equipo especial para la visualización; la reacción DAB produce bandas o puntos marrones en los lugares de reacción con anticuerpos HRP conjugados o sondas
• Opciones de envase: elija en polvo para la formulación personalizada con tampón y peróxido o un kit completo de soluciones preformuladas para un uso inmediato.

Características del kit de sustrato DAB Pierce:

• Fácil de usar: diluir en 10x solución madre a 1x tampón de peróxido estable
• Más segura: la solución DAB preformulada minimiza los problemas de seguridad con este producto químico
• Completa: incluye una solución cómoda de tampón de peróxido de hidrógeno estable (n.º de pieza 34062)
• Estable: almacenar refrigerada a 4 °C durante al menos un año; no es necesario almacenar en congelador

El DAB se ha utilizado en una variedad de aplicaciones, incluyendo Western blot, inmunohistoquímica y microscopía de electrones. Se han descrito muchos métodos de mejora para DAB que implican diferentes condiciones de tampón, la adición de iones metálicos y aplicaciones posteriores al tratamiento (Ref. 1 - 7; véase también el kit de sustrato DAB mejorado con metal Pierce, n.º de pieza 34065). Una desventaja del DAB en comparación con otros sustratos es la necesidad de utilizar la solución inmediatamente porque comienza un proceso de reacción al añadir peróxido de hidrógeno. Esto da lugar a un aumento del color de fondo del sustrato. Sin embargo, las bandas marrones resultantes de las reacciones DAB no se desvanecen tan rápidamente como los productos de color de otros sustratos de HRP precipitantes.

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Polvo de sustrato DAB (3,3'-diaminobenzidina tetrahidrocloruro)