Pierce™ DSP, No-Weigh™ Format

Thermo Scientific Pierce DSP (Lomants-Reagenz) ist ein wasserunlöslicher, homobifunktionaler N-Hydroxysuccinimid-Ester(NHS-Ester)-Crosslinker, der durch Thiole spaltbar, primär aminreaktiv und für viele Anwendungen nützlich ist. DSP enthält einen aminreaktiven NHS-Ester an jedem Ende eines 8-Kohlenstoff-Spacerarms. NHS-Ester reagieren mit primären Aminen bei einem pH-Wert von 7 bis 9. Dabei bilden sie stabile Amidbindungen und setzen N-Hydroxysuccinimid frei. Proteine, einschließlich Antikörper, weisen in der Regel mehrere primäre Amine in der Seitenkette von Lysin-(K)-Resten und am N-Terminus jedes Polypeptids auf, die den NHS-Ester-Vernetzungsreagenzien als Ziele zur Verfügung stehen. DSP ist nicht sulfoniert und unlöslich in Wasser, daher muss es zuerst in einem organischen Lösungsmittel gelöst und dann dem wässrigen Reaktionsgemisch hinzugefügt werden. Da DSP keine geladene Gruppe besitzt, ist es lipophil und membrangängig und so nützlich für die intrazelluläre und Intramembran-Konjugation. Ein sulfoniertes Analogon von DSP (DTTSP) ist wasserlöslich. DSS, das nicht spaltbare Analogon des DSP-Crosslinkers, ist auch für Anwendungen verfügbar, die einen stabilen Spacerarm erfordern, der nicht in Gegenwart von Reduktionsmitteln gespalten werden kann.

Thermo Scientific No-Weigh Produkte sind Spezialreagenzien, die in einem voraliquotierten Format geliefert werden. Die abgewogene Verpackung trägt dazu bei, den Verlust der Reagenzreaktivität und eine Kontamination im Laufe der Zeit zu verhindern, weil das Fläschchen nicht wiederholt geöffnet und geschlossen werden muss. Das Format ermöglicht die Verwendung eines jeweils frischen Fläschchens mit Reagenz, wodurch das mühsam Abwiegen kleiner Mengen von Reagenzien entfällt und Bedenken hinsichtlich der Reagenzienstabilität verringert werden.

DSP enthält an jedem Ende eines 8-Kohlenstoff-Spacerarms einen aminreaktiven N-Hydroxysuccinimid(NHS)-Ester. NHS-Ester reagieren mit primären Aminen bei einem pH-Wert von 7 bis 9. Dabei bilden sie stabile Amidbindungen und setzen die N-hydroxysulfosuccinimid-Abgangsgruppe frei. Proteine, einschließlich Antikörper, weisen in der Regel mehrere primäre Amine in der Seitenkette von Lysin-(K)-Resten und dem N-Terminus jedes Polypeptids auf, die NHS-Ester-Vernetzungsreagenzien als Ziele zur Verfügung stehen. DSS, das nicht spaltbare Analogon des DSP-Crosslinkers, ist auch für Anwendungen verfügbar, die einen stabilen Spacerarm erfordern, der nicht in Gegenwart von Reduktionsmitteln gespalten werden kann.

Merkmale von Lomants-Reagenz:

• Reaktive Gruppen: NHS-Ester (beide Enden)
• Reaktiv gegen: Aminogruppen (primäre Amine)
• Aminreaktiver NHS-Ester reagiert schnell mit jedem primären aminhaltigen Molekül
• Disulfidbindung im Spacerarm wird leicht bei 10 – 50 mM DTT oder mit TCEP bei einem pH 8,5 gespalten
• Spacerarm auch mit reduzierenden SDS-PAGE-Probenladepuffer
• Spaltbarer Crosslinker ermöglicht die Trennung von vernetzten Produkten
• Wasserunlöslich (zuerst in DMF oder DMSO auflösen); siehe DTSSP (Sulfo-DSP)
• Membrangängig, was die intrazelluläre Vernetzung erlaubt

Anwendungen:
• Chemische Vernetzung intrazellulärer Proteine vor der Zelllyse und Immunpräzipitation
• „Fixieren“ von Proteininteraktionen zur Identifizierung schwacher oder transienter Proteininteraktionen
• Gewebefixierung vor der Immunfärbung ohne Beschädigung der RNA
• Proteinvernetzung zur Erstellung von Biokonjugaten über Einzelschritt-Reaktionen
• Immobilisierung von Proteinen auf aminbeschichteten Oberflächen

Eigenschaften von DSP
• Alternative Bezeichnungen: Lomants-Reagenz, DTSP
• Molekülformel: C₁₄H₁₆N₂O₈S₂
• Molekulargewicht: 404,42
• Länge des Spacerarms: 12,0 Å (8 Atome)
• CAS-Nummer: 57757-57-0
• Reaktive Gruppen: NHS-Ester, reagieren mit primären Aminen bei pH 7,0 bis 9,0

DSP-Spezifikationen:
Wir fertigen DSP nach den höchsten Anforderungen, um die spezifischsten Biokonjugate zu produzieren, die Integrität Ihrer Daten zu gewährleisten und Ihnen ein Höchstmaß an Konsistenz zu bieten. Jede Charge DSP wird auf folgende Mindestanforderungen getestet.
• Identität: IR-Messung zeigt nur Peaks an, die für die Struktur und die funktionellen Gruppen von DSP charakteristisch sind
• Reinheit: > 95 % durch quantitative NMR (der höchste Standard für die Crosslinkerreinheit)

Produktreferenzen
Crosslinker Anwendungsleitfaden – Suchanfrage nach aktuellen Literaturangaben für dieses Produkt