FastAP wärmeempfindliche alkalische Phosphatase (1 U/μl)

Thermo Scientific FastAP Thermosensitive alkalische Phosphatase katalysiert die Freisetzung von 5'- und 3'-Phosphatgruppen aus DNA, RNA und Nukleotiden. Dieses Enzym entfernt Phosphatgruppen auch aus Proteinen.

FastAP ist eine neuartige alkalische Phosphatase, die in allen Thermo Scientific Restriktionsenzympuffern sowie in PCR-Puffern aktiv ist. Sie dephosphoryliert alle Arten von DNA-Enden (stumpf, 5'- und 3'-Überhänge) in 10 Minuten bei 37 C. Nach 5 Minuten bei 75°C ist das Enzym dann inaktiv (siehe Abbildung 1 unter Supporting Data). Daher ist die Entfernung der alkalischen Phosphatase vor der Ligation nicht erforderlich.

Highlights

• rekombinantes Enzym
• schnelle Dephosphorylierung — 10 Minuten bei 37°C
• schnelle und vollständige Inaktivierung—5 Minuten bei 75°C
• gleichzeitige Verdauung und Dephosphorylierung von Vektor-DNA
• 100 % aktiv in Restriktionsenzymen und PCR-Puffern
• PCR-Aufreinigung in Verbindung mit Exo I
• Proteindephosphorylierung

Ein Protokoll für alle Arten von DNA-Enden:
• 5'-Überhänge
• 3'-Überhänge
• stumpfe Enden
• einzelne Nukleotide

Anwendungen

• Dephosphorylierung von Klonierungsvektor-DNA zur Verhinderung von Rezirkulation während der Ligation
• gleichzeitige Verdauung und Dephosphorylierung von Vektor-DNA
• PCR-Produktbereinigung: Nukleotid-Abbau vor der Sequenzierung des PCR-Produkts
• Dephosphorylierung der 5'-Enden von Nukleinsäure vor der Markierung mit T4-Polynucleotid-Kinase
• andere Anwendungen, bei denen die Dephosphorylierung von DNA- und RNA-Substraten erforderlich ist
• Proteindephosphorylierung

Hinweis

• Die Bindung der FastAP-thermosensitiven alkalischen Phosphatase an die DNA kann zu einer Bandverschiebung in Agarosegelen führen. Um dieses zu verhindern, inkubieren Sie die Proben 10 Minuten lang mit 6X DNA-Ladefarbstoff & SDS-Lösung bei 65 °C, und kühlen Sie sie anschließend auf Eis vor Ausführung der Elektrophorese.
• FastAP Thermosensitive alkalische Phosphatase ist in allen Restriktionsenzym-Puffern aktiv und kann verdauter DNA direkt hinzugegeben werden. Eine Wärme-Inaktivierung des Restriktionsenzyms vor der Dephosphorylierungsreaktion ist nicht erforderlich.