TaqMan hPSC Scorecard Assay

Análisis cuantitativo del potencial de diferenciación en tres linajes de PSC

El panel Scorecard de célula madre pluripotente humana (hPSC) Applied Biosystems TaqMan evalúa la pluripotencia y el potencial de diferenciación en tres linajes mediante ensayos de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) en tiempo real y un software de análisis de datos intuitivo. El ensayo Scorecard de hPSC se desarrolló en colaboración con Alex Meissner y surge de su histórica publicación (Cell 2011 144:439–452). El software de análisis complementario aporta a los investigadores de cualquier parte del mundo la capacidad de comparar los perfiles de expresión génica de sus líneas de células con un conjunto común de referencia.

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¿Por qué elegimos el ensayo Scorecard de hPSC TaqMan?

Escuche a Jennifer Moore en RUCDR/Infinite Biologics sobre los beneficios que ofrece Scorecard.

Requisitos de instrumentos

Requisitos de instrumentos

Vea qué instrumentos son compatibles con el panel Scorecard de hPSC TaqMan y cómo configurarlos.

Análisis de datos

Análisis de datos

El panel Scorecard de hPSC TaqMan incluye acceso gratuito a un software intuitivo y gratuito basada en web que permite a los investigadores comparar cuantitativamente el perfil de expresión génica de su muestra con el de un conjunto de referencia.

Servicios CellModel

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¿Qué es?

Los paneles Scorecard de hPSC TaqMan confirman cuantitativamente la pluripotencia (el potencial de diferenciación en tres linajes),
tanto para líneas de células madre pluripotentes inducidas como embrionarias. El panel Scorecard de hPSC (disponible en formato de 96 y 384 pocillos) contiene 94 ensayos de expresión génica TaqMan predefinidos (incluidos controles endógenos) secados en los pocillos de la placa de ensayo. El panel de genes se desarrolló en colaboración con Alex Meissner sobre la base de su histórica publicación (Cell 144:439-452 (2011)).

Paneles Scorecard de hPSC TaqMan


El panel Scorecard de hPSC TaqMan ofrece lo siguiente:

  • Un ensayo cuantitativo para la confirmación de la pluripotencia y el potencial de diferenciación en tres linajes
  • Una comparación de los perfiles de expresión con un estándar de referencia
  • Una plataforma fácil de usar con ensayos previamente en placas y un software de análisis exclusivo e intuitivo


Descripción del protocolo:

  1. Probar las muestras no diferenciadas, de diferenciación espontánea (cuerpos embrioides, EB) o de diferenciación dirigida (monocapa)
  2. Extraer y purificar el ARN
  3. Generar el ADNc
  4. Ejecutar el panel de expresión génica en un instrumento compatible con qRT-PCR 
  5. Cargar los archivos .eds en el software de análisis Scorecard de hPSC
  6. Analizar los datos y exportar los resultados de la cómoda aplicación de análisis basada en la nube
     

Cómo ejecutar el ensayo Scorecard de hPSC

ESC/iPSC sin diferenciar

ESC/iPSC diferenciadas: Cuerpos embrioides (semana 1) o células directamente diferenciadas.

Requisitos de la muestra: >1 x 106 células/muestra

ESC/iPSC sin diferenciar

Cultivo dependiente de alimentación

Cultivo sin alimentación

ESC/iPSC diferenciadas (EB)

Aislamiento de ARN

Fórmulas

Extracción de fase orgánica TRIzol

Requisitos de la muestra: 1 ml de reactivo TRIzol por cada 6 cm de placa de cultivo

[ARN] (mg/ml) = A260 * 40

Se recomienda un coeficiente de A260/A280= 1,6 – 1,8

Analice los datos del panel Scorecard de hPSC TaqMan utilizando el intuitivo software de análisis

Inicie sesión en el software de análisis Scorecard de hPSC.

Step 1 : Cultivo celular

ESC/iPSC sin diferenciar

ESC/iPSC diferenciadas: Cuerpos embrioides (semana 1) o células directamente diferenciadas.

Requisitos de la muestra: >1 x 106 células/muestra

ESC/iPSC sin diferenciar

Cultivo dependiente de alimentación

Cultivo sin alimentación

ESC/iPSC diferenciadas (EB)

Step 2 : Preparación de ARN

Aislamiento de ARN

Fórmulas

Extracción de fase orgánica TRIzol

Requisitos de la muestra: 1 ml de reactivo TRIzol por cada 6 cm de placa de cultivo

[ARN] (mg/ml) = A260 * 40

Se recomienda un coeficiente de A260/A280= 1,6 – 1,8

Step 3 : Preparación de ADNc

8 reacciones de transcripción inversa (RT) por muestra de ARN

Preparación de ADNc

Step 4 : qRT-PCR

Descargar la plantilla de ejecución

Tipo de experimento: Curva estándar

Configuración de 384 pocillos

Configuración de 96 pocillos

Step 5 : Análisis de datos

Analice los datos del panel Scorecard de hPSC TaqMan utilizando el intuitivo software de análisis

Inicie sesión en el software de análisis Scorecard de hPSC.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.