SuperBoost Tyramide Signal Amplification

Superior imaging of low-abundance targets

Offering sensitivity 10–200 times that of standard ICC/IHC/ISH methods, Invitrogen SuperBoost kits are designed for superior signal amplification, definition, and clarity needed for high-resolution imaging of low-abundance targets. Combining the brightness of Invitrogen Alexa Fluor dyes with trusted poly-HRP–mediated tyramide signal amplification, the SuperBoost reagent generates sensitivity typically 2 to 10 times above that of standard treatments, including TSA reagents (PerkinElmer). For imaging that demands definition and clarity, bring your targets out of the background with SuperBoost signal amplification kits.

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SuperBoost Tyramide Signal Amplification

为低丰度靶标提供优质成像

Invitrogen™ SuperBoost™试剂盒的灵敏度是标准ICC/IHC/ISH方法的10-200倍,可为低丰度靶标的高分辨成像提供优质的信号放大、定义和清晰度。SuperBoost试剂将Invitrogen™ Alexa Fluor™染料的亮度与值得信赖的poly-HRP酪胺信号放大技术结合,使灵敏度比标准处理方法高2-10倍,包括TSA™试剂(PerkinElmer)。当对清晰度有一定要求时,利用SuperBoost信号放大试剂盒可使您的靶标在背景中脱颖而出。

选择SuperBoost试剂盒

SuperBoost技术

  • 用于低丰度、难检测靶标的最灵敏的荧光成像检测方法
  • 易于使用,生成的信号可兼容标准滤镜
  • 高分辨率成像,可对荧光蛋白、DAPI、二抗和其他SuperBoost试剂盒进行多重检测
2 panel figure showing superior sensitivity from SuperBoost kits

图1. SuperBoost试剂盒具有卓越的灵敏度。使用不同浓度的抗prohibitin抗体(生产商建议按1:150稀释或稀释至终浓度5 µg/mL)孵育HeLa细胞,随后使用下列试剂标记:(1)Invitrogen™ Alexa Fluor 488 Tyramide SuperBoost试剂盒 (山羊抗兔IgG和Alexa Fluor 488 Tyramide);(2)我们的经典Invitrogen™ TSA试剂盒#12 (山羊抗兔IgG和Alexa Fluor 488 Tyramide);或(3)Invitrogen™ F(ab′)2兔抗山羊IgG (H+L)二抗。利用Invitrogen™ EVOS™ FL自动成像系统采集各种处理方法生成的细胞图像(采用相同的曝光和增益)。这些图像表明,Alexa Fluor 488 Tyramide SuperBoost试剂盒的灵敏度高于经典TSA试剂盒或直接标记二抗。


多重检测能力

SuperBoost试剂盒可兼容多种其他标记物检测和细胞染色技术,可用于多重检测实验和荧光共定位研究。例如,SuperBoost试剂多重检测可用于:

  • 荧光标记物复染,如DAPI
  • 荧光蛋白(即,GFP&RFP)
  • 标准ICC/IHC
  • 其他SuperBoost试剂盒

产品手册中包含详细方案。

与GFP和RFP共用

利用Invitrogen™ CellLight™ Peroxisome-GFP, BacMam 2.0处理HeLa细胞,使细胞的过氧化物酶体表达GFP。使用Invitrogen™ Image-iT™固定/透化试剂盒处理细胞后,孵育prohibitin抗体,并使用Alexa Fluor 594 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗鼠IgG和Alexa Fluor 594 tyramide)中的试剂进行标记。利用Invitrogen™ NucBlue™ Fixed Cell ReadyProbes™试剂标记细胞核。利用共聚焦显微镜进行成像。

与标准ICC/IHC共用

利用Image-iT固定/透化试剂对HeLa细胞进行固定和透化处理,并孵育抗tubulin一抗和Alexa Fluor 488山羊抗鼠IgG (H+L)二抗。随后,使用抗ATP合成酶亚基IF1抗体 孵育细胞,并使用Alexa Fluor 594 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗鼠IgG和Alexa Fluor 594 tyramide)中的试剂进行标记。利用Invitrogen™NucBlue™ Fixed Cell ReadyProbes™试剂标记细胞核。利用共聚焦显微镜进行成像。

与其他SuperBoost试剂盒共用

利用Image-iT固定/透化试剂对HeLa细胞进行固定和透化处理,孵育抗prohibitin抗体,并使用Alexa Fluor 647 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗兔IgG和Alexa Fluor 647 tyramide)中的试剂进行标记。此外,使用抗β-catenin抗体孵育细胞,并使用Alexa Fluor 488 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗鼠IgG和Alexa Fluor 488 tyramide)中的试剂进行标记。利用NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂标记细胞核。利用共聚焦显微镜进行成像。

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简单的工作流程

可兼容ICC、IHC和FISH

SuperBoost试剂盒适用于标准ICC、IHC和FISH法常用的细胞类型和荧光成像系统。我们利用来自2D和3D培养物、FFPE组织和冷冻切片组织的甲醛固定细胞株,对SuperBoost试剂盒的性能进行了检测。

免疫细胞化学(ICC)

经固定和透化处理的HeLa细胞,孵育抗ATP合成酶抗体和Alexa Fluor 594结合型二抗。此外,使用抗β-catenin抗体 孵育细胞,并使用Alexa Fluor 488 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗鼠IgG和Alexa Fluor 488 tyramide)中的试剂进行标记。利用NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂标记细胞核。利用共聚焦显微镜进行成像。

免疫组织化学(IHC)

利用抗组蛋白2B抗体孵育福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的大鼠小肠组织。随后,利用Alexa Fluor 594 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗兔IgG和Alexa Fluor 594 tyramide)中的试剂检测该抗体。利用 NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂标记细胞核,并使用ProLong™ Diamond抗淬灭试剂处理样品。利用EVOS FL自动成像系统进行成像和分析。

荧光原位杂交(FISH)

利用标准方法对U2OS细胞进行固定和透化处理。为实现荧光原位杂交(FISH),利用hprt基因探针孵育细胞,并使用Alexa Fluor 488 Tyramide SuperBoost试剂盒(山羊抗鼠IgG和Alexa Fluor 488 tyramide)中的试剂进行检测。利用NucBlue Fixed Cell ReadyProbes试剂标记细胞核。利用EVOS FL自动成像系统进行成像和分析。

工作流程与标准ICC/IHC/FISH相似

SuperBoost试剂盒基于酪胺信号放大,利用辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性,生成高密度的靶蛋白或核酸序列原位标记。SuperBoost试剂盒的工作流程与标准ICC、IHC和FISH相似。在该工作流程中,荧光基团结合的二抗被poly-HRP结合的二抗取代。唯一增加的步骤是利用结合型酪胺孵育2-10分钟,并在检测到特异性信号后加入终止液终止HRP活性。此外,终止液也有助于维持荧光信号的特异性和分辨率。

Workflow diagram for signal amplification using SuperBoost kits

图2. SuperBoost试剂盒的工作流程。该试剂盒的工作流程与标准ICC/IHC/FISH相似,只需几步即可灵敏检测到目标蛋白。

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TSA技术适用于哪些领域?

免疫组织化学 (IHC)

TSA for immunohistochemistry通过使用TSA技术可以检测到传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够在无需牺牲分辨率的条件下提供前所未有的敏感度。

仅需一个简单的孵育步骤对样本进行处理,即可获得样本的多色标记信号;同时,该技术可与其他信号放大系统或传统标记方法联合使用,用于共定位的相关研究。

荧光原位杂交(FISH)

Fluorescence in situ hybridization (FISH)多色荧光原位杂交(FISH)技术让您能够在单一样本中实现对多个靶标的同步分析,并使共定位信号可视化。该项技术采用光谱上可明确区分的荧光基团对每个杂交探针进行单独标记,通过多色视觉显示,为您提供同时解析数个遗传因子或多个基因表达谱的分辨能力。

基于酪酰胺的信号放大技术适于在何种情况下使用?

Life Technologies提供了一整套用于荧光成像的检测技术。通过使用该工具套装,您可以针对您的靶标丰度选择最佳的检测技术,使用最合适的检测波长匹配您的多色标记实验。

  • 高丰度靶标 —— 一级偶联物,无需进行信号放大
  • 中等丰度靶标 —— 二级偶联物,适度信号放大
  • 中低丰度靶标 —— 链霉亲和素偶联物,需要显著增强信号
  • 低丰度靶标 —— 酶学放大,以获得最大的信号增强效果
 

更高水平的荧光灵敏度

通过使用多种酪酰胺底物针对每个过氧化物酶标记进行专一性的信号放大,实现了对低丰度靶标的超高灵敏度检测。通过酪酰胺信号放大(TSA)技术,您能够观察之前不能清晰检测的靶标,而现有的染料颜色范围也为您的多色标记实验提供了的更多选择。Life Technologies提供一系列TSA试剂盒,您可针对单一标记或多色检测的不同应用来选择特定的波长。

  Tyramide signal amplification (TSA)Enlarge Image
使用二级免疫荧光、TSA信号放大和核酸复染的斑马鱼视网膜图像。

A zebrafish cryosection incubated with the biotin-XX conjugate of mouse monoclonal anti–a-tubulin antibody. The signal was amplified with TSA Kit #22 with HRP–streptavidin and Alexa Fluor 488 tyramide. The sample was then incubated with the mouse monoclonal FRet 6 antibody and was visualized with Alexa Fluor 647 goat anti–mouse IgG, which is pseudocolored magenta. Finally, the nuclei were counterstained with SYTOX Orange nucleic acid stain.

保证高分辨率和低背景

对一级检测试剂更高程度的稀释能够降低非特异性标记,TSA分析法就是专门针对更高的抗体稀释度、更强的检测特异性和更低的背景信号而设计的。在信号放大反应中荧光染料基团与邻近靶标的蛋白质共价结合,这使得TSA技术成为对蛋白进行高分辨率亚细胞定位的理想选择。

  Tyramide signal amplification (TSA)Enlarge Image
使用免疫检测、TSA放大和核酸复染的斑马鱼视网膜图像。
A zebrafish retina cryosection was labeled with the mouse monoclonal antibody FRet 43, which was detected using TSA Kit #10 with the HRP conjugate of goat anti–mouse IgG antibody and Pacific Blue™ tyramide. The nuclei were counterstained with the SYTOX Orange nucleic acid stain.

使用更少的抗体获得更多的数据

当您的一抗有限或比较昂贵时,酪胺信号放大(TSA)技术能够在更高的抗体稀释比例下产生灵敏的信号。由于在更低的抗体浓度下非特异性结合少,进而也改善了反应的特异性;与此同时您昂贵一抗的用量也随之减少。

  Tyramide signal amplification (TSA)Enlarge Image
使用免疫检测、TSA放大和核酸复染的斑马鱼视网膜图像。
A zebrafish retina cryosection labeled with the mouse monoclonal antibody FRet 43 and detected using TSA Kit #2 with the HRP conjugate of goat anti–mouse IgG antibody and green-fluorescent Alexa Fluor 488 tyramide. The nuclei were counterstained with blue-fluorescent Hoechst 33258.

方便应用于多色共定位实验

TSA技术可以在单一样本中使用杂交探针同时鉴定多个靶标。对于每种荧光标记的酪酰胺,仅需一步简单的孵育反应即可完成与HRP的反应并共价结合邻近靶标的蛋白。在多色检测实验中,依次加入每种荧光基团进行孵育,并在每两个TSA反应之间进行过氧化物酶的灭活步骤。

  Fluorescence in situ hybridization (FISH)Enlarge image
果蝇胚胎的四色荧光原位杂交实验。 
A late blastoderm stage (nuclear cycle 14) embryo was probed with four different RNA probes.Blue: sog labeled with DNP, followed by a rabbit anti–dinitrophenyl-KLH IgG antibody detected with an Alexa Fluor 647 chicken anti–rabbit IgG antibody. Green: ind labeled with biotin, followed by streptavidin HRP and Alexa Fluor 350 tyramide ( TSA Kit #27. Red: msh labeled with digoxigenin followed by sheep anti-digoxigenin antibody detected with an Alexa Fluor 488 donkey anti–sheep IgG antibody. Yellow: sna labeled with fluorescein followed by mouse anti-fluorescein antibody detected with an Alexa Fluor 555 goat anti–mouse IgG antibodyEnlarge Image. Image contributed by Dave Kosman and Ethan Bier, University of California, San Diego.

Tyramide SuperBoost试剂盒的订购信息

标记酪胺(Ex/Em)
Tyramide SuperBoost试剂盒*
抗鼠IgG(宿主:山羊)
抗兔IgG(宿主:山羊)
链霉亲和素
Alexa Fluor 488 (495/519 nm) B40912
B40941 (50 个盖玻片)
B40922
B40943 (50 个盖玻片)
B40932
Alexa Fluor 555 (555/565 nm) B40913 B40923 B40933
Alexa Fluor 594 (591/617 nm) B40915
B40942(50 个盖玻片)
B40925
B40944(50 个盖玻片)
B40935
Alexa Fluor 647 (650/668 nm) B40916 B40926 B40936
生物素-XX偶联物 B40911 B40921 B40931
*除非另有说明,材料可供最多150片18 mm x 18 mm玻片使用(假设最关键的孵育步骤使用150 µL)。可根据样品大小调整使用体积。
资源

细胞分析支持中心
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